(站内联系TA)一般GC含量低的话把引物序列设计稍微长一点,就可以补偿Tm低的问题.你说的百分比差别也不是那么大.如果两个引物的tm不同,按照低的考虑PCR的退火温度.加酶切位点的引物的Tm需要按照不包含酶切位点的序列计算.xikexiao(站内联系TA)GC含量最好在50%以上比较好,不然退火温度达不到,建议重新设计引物...
GC含量越高，退火温度也就越高，过高的退火温度会使引物不能与模板很好地结合，得不到扩增产物。
pcr技术中引物如果gc含量高,复性时需要的温度要怎么样 引物GC含量高,会增加退火温度,别的影响不是很大,如果扩增的产物GC含量高,最好用专业的taq酶扩增 猜你关注广告 1华为激活日期 2大电流发生器 3全国司法考试 复古传奇网页 真传奇官网 股票解套 九游神途官网 网站新开网 香奈儿 二建考试报名 网...
引物 足够长时，即使gc含量很少，也没关系，试试吧。设计引物时，软件中设计的什么GC含量指标，delta G指标，Tm指标等等只是个参考，不要局限于其中，实际情况可能和软件预测不一致。这是试试最关键，一般来说，引物超过20nt，不论上述指标如何，都能扩出目的带。若扩不出，在仔细考虑多种因素，不仅...
一般GC含量低的话把引物序列设计稍微长一点，就可以补偿Tm低的问题。你说的百分比差别也不是那么大。
具体为：首次循环加热到95度后,暂停PCR,开盖,逐个加入PCR酶,然后降低退火温度,可以做一个梯度,每次降低一度试试.如果上述方法不行,你应该重新设计引物,保证16-18个配对碱基的前提下,用软件模拟避免发卡结构和引物互补,保证GC含量在55%左右. 再P不出来,你就查你的目的基因序列去,肯定弄错序列了 ...
引物长度和专一性 常见的引物长度为18-30个碱基。 短的引物（≤15碱基）能非常高效地结合, 但是它们的专一性不够。较长的引物能提高专一性，然而退火效率低，从而导致PCR产量低下。同时应避免编码单一序列和重复序列的引物。
本帖内容被屏蔽
gc之间3个氢键，打开时需要的能量更多，被扩增的机会相对少，导致最终pcr结果中低gc含量的片段扩增的比高gc含量的片段多，除了gc含量，二级结构也会影响扩增
我估计你是把引物分别设计在3’和5‘，然后主要p中部，这样得到的只是中部的准确序列，（2端是引物序列），如果不是测序而是仅作检测的话是可以了。嫌3’低了，往上游移动下。另外GC低不怕，高才可怕。--- 原核表达么？那挺复杂的，问师兄师姐以前怎么做的。3'GC低不怕，只要全长p出来，测序成...