出现双峰就说明你的引物不是特异的,他还引起了其他基因的扩增,因为溶解曲线上的峰对应相应的扩增产物!!你的引物设计应该有问题,得重新设计了!!非特异性扩增
跨外显子设计的引物跑出来是双峰。主要是区分cDNA和DNA,因为跨了两个外显子,在扩增的时候由于DNA链长,需要的延生时间长,合理设置延伸时间可以避免DNA污染。增加结果可信度,区分cDNA和DNA使结果更加精确,有基因组DNA污染,溶解曲线肯定是双峰。跨外显子相关资料 在非模式物种的系统发育学研究中,跨...
如果半定量的扩增产物长度不是太大的话是可以的,如果产物太长就不建议用去做定量了 可以用的
只有出现一条单峰的溶解曲线,才能确定结果的准确性。详细来说,如果所有样本都有双峰,可能是由于引物二聚体的存在,或者是引物设计不够优化。此时,需要重新设计引物。另外,如果模板浓度过低,可以适当提高模板浓度。而如果引物浓度过高,可以稀释引物浓度至10umol。如果部分样本出现了杂峰,可能是由于交叉污染或样本污染导致的...
之前我也出现过这个情况,但是再重复一次就没有了 发自小木虫IOS客户端
反之,如果有双峰、或多个峰,则说明管内的产物不均一,有的长有的短。当两个峰越靠近且高度接近,左侧峰更低时,证明管内存在一个非特异性扩增产物,但长度较短,反之就是非特异性产物更长;如果两个峰隔得很远,且杂峰很低,那证明非特异性产物可能是引物二聚体。#实验知识科普#分子生物学#生命科学...