层析柱柱效测定是评估层析柱性能的关键步骤。柱效测定通常通过Pulse test方法进行,即使用少量样品流经层析柱,并通过检测器检测实验过程,之后对洗脱峰进行分析。柱效主要通过两个参数来确定:一是理论踏板高度(HETP),它反映了柱子的分离效果;二是对称性(As),它主要反映峰的对称性。HETP和As的具体数值有相应的判断标准,...
层析柱柱效测定是利用不同成分在固定相和移动相之间的分配系数不同,来进行成分分禶的一种分离和检测方法。在层析柱柱效测定过程中,首先将待测物样品通过固定相柱,然后通过外加的移动相进行洗脱,不同成分在移动相中的迁移速率不同,从而实现各成分之间的分离。最终,利用检测器对不同成分进行检测和测定。 二、步骤 1...
一、柱效测定标准 Pulse test是目前最常用的测试方法,即使用少量的样品流经装填好的层析柱中,通过仪器上的检测器检测实验过程,实验结束后对洗脱峰进行分析。 柱效测定主要通过计算理论踏板高度(HETP)和对称性(As)来确定。 01、理论踏板高度 1952年,马丁(Martin)和欣革(Synge)最早提出踏板理论(Plate theory),把一根...
层析柱柱效测定是常用的纯化和分离方法,但在使用过程中容易出现搭桥的问题。搭桥的原因主要包括柱面积过小、吸附剂颗粒不均匀、淋洗溶液及洗脱溶液中存在离子强度不一致、样品中存在高分子物质等。为避免出现搭桥的情况,应该选用合适的柱、均匀撒布吸附剂、调整离子强度、去除样品中的高...
层析柱柱效的测定方法 方法一（适用于凝胶过滤和离子交换层析）样品：以2%丙酮溶解于水溶液中溶液：纯化水上样量：控制在1%的柱体积（CV）流速：维持在20-40厘米/小时（cm/h）方法二（适用于反相和疏水层析）样品：以2%丙酮溶解在20%乙醇中溶液：20%乙醇上样量：同样为1% CV流速：20-40 cm/h 方法三（适用于...
——— 装柱方法 ——— 许多装柱模式与方法可用,常用的方法为恒定流速,恒定压力,吸力(suction),在位装柱(pack-in-place)和轴向压缩(Axial Compression)。总的来说,所有的层析柱都可以用恒流或者恒压方法进行装柱。如果制造商未提供装柱方法,推荐使用恒流或者恒压方法进行装柱。 在恒流或者恒压...
层析柱的柱效测定在纯化实验中至关重要，确保实验结果准确可靠。在自行装柱前，建议进行柱效测定以评估柱子性能。若层析柱使用过多次，或出现实验结果异常、柱内气泡、超压等问题时，再次进行柱效测定能判断柱效是否正常。柱效测定的核心是理论踏板高度(HETP)和对称性(As)。HETP是柱效的重要指标，反映柱子的...
柱效测定实验是常用的层析柱性能测试方法,其结果直接反映了层析柱的分离效率和分布均匀性。在进行柱效测定实验时,需要注意以下几点事项: 1. 选择合适的测试溶液:根据不同填料和要测试的分子特性选择合适的测试溶液。 2. 控制操作温度:温度的变化会直接影响柱效测定结果,因此需要在...
层析柱在装填后柱效的测定即能检测装填效果又能检测分离性能,特别是凝胶过滤层析,测柱效是非常重要的,柱效是衡量凝胶过滤层析柱性能的一项主要指标,柱效越高,分离能力越强。柱效通常用通常用理论塔板数、有效塔板数、理论塔板高度、有效塔板高度等表示。
⑶装填好的层析柱。使用平衡缓冲液在测柱效的流速下至少平衡1.5 CV(柱体积),平衡方向与测柱效方向必须 一致 ⑷样品环。容积大于1%柱体积。 2. 试剂选择 测柱效主要有两种测试系统:1 NaCl 测试系统;2 丙酮测试系统。只要操作正确,两个系统测出来的结果是 基本一致的。但是要注意:各试剂的浓度不能随意改变,否则影...