实时荧光RT-PCR的原理基于传统的聚合酶链反应(PCR)技术和逆转录(RT)技术,同时引入了荧光探针并利用了荧光信号的强度和需求时间。实时荧光RT-PCR包括三个主要步骤:逆转录、扩增反应和检测。 在逆转录步骤中,首先需要提取目标RNA(信使RNA)并将其转录成互补的DNA分子,这一步骤称为逆转录。逆转录酶会选择性地识别RNA...
(12分)新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程如下:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。下图是RT-PCR两步法的过程图,在PCR扩增时,加入能与目的基因(新冠病毒的核壳蛋白N基因)结合的荧光探针,目的基因合成越多,荧光信号越强。请...
实时荧光RT-PCR技术是将逆转录(RT)、PCR以及荧光标记等相结合的技术,是检测新型冠状病毒核酸序列最常用的方法。其具体的过程为:从样品中提取RNA→cDNA→PCR扩增→荧光检测。回答下列问题:(1)RT-PCR操作过程中,所需的酶有___。PCR过程中温度的控制至关重要,需要依次设置不同的循环温度参数:95℃-30s、55℃-45...
本实验将该系列引物和探针引入果蔬中HAstV的检测,通过对10倍梯度稀释的cRNA进行进行实时荧光定量RT-PCR扩增分析,发现该系列引物和探针的扩增效率达95%以上,最低检测限可达5.6拷贝/反应,且检测Ct值同模板拷贝数的对数值存在良好的线性关系,R2达0.997,从而...
图1和图2所示新冠检测基本原理是:将新冠病毒RNA逆转录为DNA,采用多重荧光RT-PCR技术,因此荧光PCR法所用的试剂盒中通常都应该含有:逆转录酶、热稳定性DNA聚合酶(Taq酶)、TaqMan探针、引物、dNTP、Mg2+、缓冲剂系等。(2)由图2可知,引物、TaqMan探针能与模板链结合,因此,探针是依据新冠病毒RNA内部的一段序列(...
目前广泛应用的新型冠状病毒检测方法是实时荧光RT-PCR技术。RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术,具体过程如图所示。下列说法错
人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR检测方法 1范围 本文件规定了人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR检测的术语和定义、缩略语、生物安全要求、防污 染要求、主要仪器、主要试剂、检测程序、结果判断。 本文件适用于临床样本咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物或呼吸道抽取物、深咳痰液、诱导痰液、支 气管冲洗液、肺泡灌洗液和...
防疫科普丨什么是单基因阳性?新冠病毒核酸检测使用的实时荧光RT-PCR方法是如何进行检测的?政务:防城港妇女 2022-02-11 19:43 来源:科普中国 版权归原作者所有,如有侵权请联系删除 原标题:《防疫科普丨什么是单基因阳性?新冠病毒核酸检测使用的实时荧光RT-PCR方法是如何进行检测的?》...
现有第五版新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案中,关于确诊病例需要两个病原学证据之一,其一是呼吸道标本或血液标本实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性,其二是呼吸道或血液标本基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源。综合考虑时间、费用尤其是病患较多等诸多情况,前者对于已感染病患的确诊来说尤为重要。