(10分)新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。下图是RT-PCR两步法的过程图,在PCR扩增时加入能与目的基因(新冠病毒的核壳蛋白N基因)结合的荧光探针。目的基因合成越多,荧光信号越强,回答下列...
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR 通常用于基因表达分析、病毒载量定量和基因突变检测等应用。 RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1、反转录: 1...
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或 RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。荧光定量PCR其本质是通过荧光探针或荧光DNA结合染料和实时荧光定量PCR仪器对PCR扩增产物进行检测和定量,仪器在PCR热...
人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR检测方法 1范围 本文件规定了人呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR检测的术语和定义、缩略语、生物安全要求、防污染要求、主要仪器、主要试剂、检测程序、结果判断。 本文件适用于临床样本咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物或呼吸道抽取物、深咳痰液、诱导痰液、支气管冲洗液、肺泡灌洗液和病...
新型冠状病毒的检测可以采用实时荧光RT-PCR (逆转录聚合酶链式反应)的方法,RT-PCR的具体过程如图。下列有关叙述错误的是( )s'3mRNA CDN
该一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液增加了NH4 + 和N 3 ‑ ,提高PCR反应效率,适用于PCR技术的高效扩增型和灵敏检测,其不仅具有稳定性好,荧光效果佳、灵敏度高的优点。该实时荧光PCR方法,通过采用一步法实时荧光RT‑PCR反应缓冲液配置成荧光RT‑PCR反应体系,其具有结果可靠和准确灵敏、操作简单、省时省力、...
目前广泛应用的新型冠状病毒检测方法是实时荧光RT-PCR技术。RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术,具体过程如图所示。下列说法错
方法首先,选择合适的特异引物和探针,分子生物方法制备质粒标准品,优化PCR体系和反应条件;其次,评估该实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏性、特异性及稳定性;最后,验证该方法对登革病毒感染小鼠血清和组织样本的适用性。 结果成功确定一步法实时荧光定量RT-PCR方法该,方法较为灵敏,最低检测线为49.6Copies/μL,方法特异性好...