如图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测新型冠状病毒核酸的基本流程,1～2h内即可得到检测结果。其基本原理是在DNA的复制过程中加入与特定模板链互补的荧光探针,这样
“实时荧光定量RT-PCR”是新冠疫情防控的一把利刃,通常在l～2h内即可得到检测结果。TaqMan探针是实时荧光定量RT-PCR技术中一种常用探针(如图1),其5末端连接荧光基团(R),3末端连接淬灭剂(Q)。当探针完整时,R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在PCR扩增过程中,当Taq酶遇到探针时会使探针水解而释放出游离的R和...
1、所说的PCR应该就是最常规的PCR,以DNA为模板,通过上下游引物,实现DNA的扩增。 2、RT-PCR一般情况下是指反转录PCR(reverse transcription),尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也(realtime fluores-cence quantitative PCR)也简称RT-PCR,但是这是不对的,不推荐。 基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录,然后将所...
下图为采用“实时荧光定量RT-PCR(即将病毒RNA逆转录后再进行PCR扩增)”技术检测2019nCoV核酸的基本流程,1～2h内即可得到检测结果。有关说法正确的是( ) A. 过程①是逆转录过程,不属于中心法则的内容 B. 过程②表示扩增DNA片段,需使用RNA聚合酶 C. 荧光标记法还可以用于探究DNA的复制方式 D. RT-PCR反应体系中...
RT-PCR过程中cDNA的合成为逆转录过程,需向装置中添加逆转录酶。 (2) 根据图示,RNA提取裂解液含有的蛋白酶K,可以促进病毒蛋白质的水解,起到灭活病毒的作用。采样后迅速进行病毒灭活,可以防止样本在运输和检测阶段造成病毒泄漏,以提高样本转运和检测阶段的安全性。步骤③是DNA的复制,需要热稳定的TaqDNA聚合酶催化,...
RT-PCR实验检测服务 实时PCR(real-time PCR),属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。定量方式包括全部定量和相对定量。可检测mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷贝数变化。 实验步骤 1、引物设计与合成 2、DNA/RNA抽提 ...
现有第五版新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案中,关于确诊病例需要两个病原学证据之一,其一是呼吸道标本或血液标本实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性,其二是呼吸道或血液标本基因测序,与已知的新型冠状病毒高度同源。综合考虑时间、费用尤其是病患较多等诸多情况,前者对于已感染病患的确诊来说尤为重要。
为了证明Azure Cielo™ 实时荧光定量PCR系统的多重性能,使用人cDNA样本分别进行了单重及6重的RT-qPCR检测。 方法 单重RT-qPCR实验:均使用人cDNA样本,配制各自的20uL单重PCR反应液,2次重复,进行6个荧光通道的检测。 6重RT-qPCR实验:使用250ng至1.95ng的人cDNA样本两倍梯度稀释液,配制20uL的6重PCR反应液,2次...
《鸭坦布苏病毒RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测方法》是2020年04月03日实施的一项中国地方标准。编制进程 2020年03月03日，《鸭坦布苏病毒RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测方法》发布。2020年04月03日，《鸭坦布苏病毒RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测方法》实施。起草工作 起草单位：浙江省动物疫病预防控制中心...