实时定量反转录聚合酶链式反应(Real-Time Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chn Reaction,简称实时定量RT-PCR)是一种在DNA扩增过程中,通过荧光信号实时监测反应产物量的变化,从而得到起始模板量的分析方法。这种技术结合了反转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)两个过程,使得RNA模板也能进行定量分析。 实时定量RT...
荧光定量RT-PCR法的基本原理是将DNA模板、引物和荧光探针等反应物混合,通过PCR循环放大检测靶基因的扩增情况。同时,荧光探针会针对扩增过程中特定的DNA序列,在扩增过程中实时释放荧光信号,被激光器反射和检测器捕获并传输到计算机上,计算机软件将荧光信号转化为数字图像,进而通过数据分析进行扩增曲线、相对丰度等指标的计算...
RT-PCR数据分析方法(相对定量) RT-PCR数据分析方法(相对定量) 1.1.以质量单位作为标准进行相对定量 条件:要求准确地量化初始材料,如细胞数目或核酸的微克数。 当用相对定量法比较多个样本时,选择一个样本作为校验样本(Calibrator,即对照),所有样本目标基因的表达都以对照为标准上调或下调。通常用未处理作为对照。 用...
摘要:为建立鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,对DTMUV的NS5基因设计特异性引物和MGB探针,使用RT-PCR扩增NS5基因并将其连接到pEASY®-T1载体上构建重组质粒,提取阳性重组质粒作为qRT-PCR阳性模板绘制...
本实验将该系列引物和探针引入果蔬中HAstV的检测,通过对10倍梯度稀释的cRNA进行进行实时荧光定量RT-PCR扩增分析,发现该系列引物和探针的扩增效率达95%以上,最低检测限可达5.6拷贝/反应,且检测Ct值同模板拷贝数的对数值存在良好的线性关系,R2达0.997,从而...
实时荧光定量PCR(RT-qPCR)是一种用于实时扩增和检测特定DNA或RNA序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的DNA或RNA分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR通常用于基因表达
在登革热病毒感染早期检测中,荧光定量RT-PCR主要用于检测患者血清或组织样本中的登革热病毒RNA。相比于ELISA法,荧光定量RT-PCR具有更高的灵敏度和特异性,能够准确检测病毒感染并区分活病毒和死病毒。荧光定量RT-PCR还可以定量分析病毒载量,是一种更加精准的检测方法。荧光定量RT-PCR技术复杂,需要专业设备和操作技能,且...
方法首先,选择合适的特异引物和探针,分子生物方法制备质粒标准品,优化PCR体系和反应条件;其次,评估该实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏性、特异性及稳定性;最后,验证该方法对登革病毒感染小鼠血清和组织样本的适用性。 结果成功确定一步法实时荧光定量RT-PCR方法该,方法较为灵敏,最低检测线为49.6Copies/μL,方法特异性好...
荧光定量PCR 一步法RT-PCR 使用说明书 本试剂盒适用于各种动、植物、病毒RNA 的荧光定量PCR 检测，反转录PCR 反应体系为 30µl ，用户在使用此试剂盒之前请详细阅读此说明书。本试剂盒主要有两个部分组成：RT-PCR MIX 和2×反应缓冲液。RT-PCR MIX 由反转录酶和Taq DNA 聚合酶组成的混合酶，既可cDNA ...