实时荧光定量pcr仪是用于荧光测量的仪器。该设备由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景...
实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR,qPCR)的数据分析主要有绝对定量法和相对定量法两种方法。 所谓绝对定量法,即对未知样品的拷贝数进行测定的方法,如血样中的病毒、支原体、衣原体的定量分析、食品中某一转基因成分的含量分析等。 而相对定量法主要是以某一内参基因做对照,进而比较两个或多个样本之间某一...
荧光定量PCR是实验室中出镜率非常高的一种检测方法。该方法通过在PCR体系中添加荧光基团来记录DNA产物的累积情况,从而达到对PCR过程进行实时监控的目的,并且可以通过数据分析计算出起始模板量,这就是“荧光定量”中“定量”一词的来源。 荧光定量PCR实验因为灵敏度高所以经常是差之毫厘谬以千里,所以在实验过程中,我们...
qPCR实时定量PCR（real-timePCR）是一种在DNA扩增时（即实时）对其定量的方法，常用于基因表达定量、病...
什么是实时荧光定量PCR (RT-PCR,qPCR)? 实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行监测的能力(即实时)。因此,数据可在PCR扩增过程中,而非PCR结束之后,进行收集。这为基于PCR的DNA和RNA定量方法带来了革命性的变革。在实时荧光定量PCR (qPCR)中,反应以循环中首次检测到目标扩增...
1.什么是荧光定量PCR? 荧光定量PCR(Quantitative Real-timePCR,qPCR)是一种在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 2.荧光定量PCR的原理 qPCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光...
本文将概述PCR定量方法的原理、步骤和应用。 一、PCR定量方法的原理 PCR定量方法是基于PCR技术的扩增效率与起始模板浓度成正比的原理。在PCR反应中,模板DNA以指数级倍增,而每个PCR周期后,扩增效率会逐渐降低。通过确定PCR周期数和目标序列浓度之间的关系,可以利用定标曲线或计算方法来定量目标DNA的起始浓度。 二、PCR...
荧光定量PCR原理和过程已经非常清楚，为方便初学者更加清晰的学习，为大家汇总了荧光定量PCR常用术语，供您查阅参考使用。循环阈值(CT)或交叉点（CP）：扩增曲线穿过阈值的循环（即，荧光检测值显著增加的点）。CT可以是一个分数，并且可以计算起始模板量。ΔCT值： ΔCT值描述了靶标基因和相应的内参基因CT值的差值...
1、这里的三张图片分别展示了我们在做荧光定量PCR时提到的三个名称：扩增曲线，标准曲线，熔解曲线。（1）扩增曲线：扩增曲线有两种展现形式，一种是线性，一种是对数形式。我们通常是用CT 来推算样品中样品的浓度。CT 值越高说明模板浓度越低。上面也详细说明了原理，在这里就不过多赘述。（2）标准曲线：将已知...