3. 大肠杆菌电转化及电转感受态细胞的制备 电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔,同时, DNA 在电场力的作用下进入细胞,随后细胞复苏和弥合,从而实现质粒 DNA 的物理转移。为避免电击时出现“击穿”,即产生电流,细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。转化效率为 109 ～ 10 10 转化子 /µg DNA 。 3.1 .感受态...
在电转化过程中,使用感受态细胞进行DNA转化可以提高转化效率和获得更多的转化子。因此,制备感受态细胞及其转化方法研究对开展基因克隆和表达等方面的研究具有非常重要的意义。 感受态细胞制备方法 1.大肠杆菌菌株及培养基选择 本实验使用大肠杆菌DH5α菌株,培养基为Luria-Bertani(LB)培养基。 2.细胞质壁分离方法 将DH5...
大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法 (Jin Quan‐Wen Lab at XMU) 一、大肠杆菌电转化感受态细胞制备:一、大肠杆菌电转化感受态细胞制备: 第一天:第一天: 1. 用枪头或接种环挑取单克隆菌落, 接种入盛有5ml LB液体培养基的培养管中,可以准备两管。37C,220rpm,培...
大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1.将适合菌株(如XL1-Blue, DH5z)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过 夜培养 2.高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3.准备几瓶灭菌水(总量约1 .5升) ,保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天: 4.转移0.2-1ml过夜培养物至装有...
大肠杆菌电转化感受态细胞制备第一天:将适合菌株(如XL1-Blue,DH5a)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用第二天:转移0.2-1ml过夜培养物至装有500mlLB(或其他营养丰富的培养基)...
高效率的电激发转化大肠杆菌感受态细胞的制备方法 培养基: (1)用Bacto公司的Tryptone/yeast extract配制SOB(1L:20g tryptone, 5g yeast extract, 2mL 5M NaCl, 2.5mL 1M KCl。(注意:本实验的SOB不含Mg+,有些书得SOB配方含有Mg+) (2)SOC:在100mL SOB中加入2mL过滤除菌的glucose,1mL 1M MgCl2, 1mL 1M ...
制备高效大肠杆菌电转化感受态细胞和电转化条件的研究_朱森康
电转化法制备大肠杆菌..1.前夜接种受体菌( DH5α或 DH10B),挑取单菌落于 LB 培养基中 37℃摇床培养过夜;2.取 2ml过夜培养物转接于 200ml LB 培养基中,在 37℃摇床上剧烈振荡培养至 OD600=
摘要,摘要,本文主要介绍了大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法,第一天,第一天,将适合菌株,如,置于或其他营养丰富的培养基上,在,下过夜培养,高温灭菌大的离心瓶,以备第二天摇瓶用,准备几瓶灭菌水,总量约,升,保存于冷冻室中以备第二天重悬浮