收集下清液,即可得到包含外膜蛋白的样品。 二、细菌外膜蛋白纯化方法: 1.柱层析 将得到的外膜蛋白样品加入柱层析载体,如凝胶过滤柱、离子交换柱或亲和柱等,利用各种交互作用力将目标蛋白从杂质中分离出来。 2.SDS-分析 对层析纯化后的外膜蛋白样品进行SDS-分析,以确定纯化后的目标蛋白质的纯度和相对分子量。 3. ...
绿脓杆菌外膜微孔蛋白的分离与纯化 微孔蛋白绿脓杆菌纯化选用绿脓杆菌 PAO1菌株 ,以 EDTA-溶菌酶法与超速离心法提取其外膜蛋白 ,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其外膜主要蛋白的分子量 ,并利用高效离子交换液相色谱法纯化外膜微孔蛋白左联中国医学科学院药物生物技术...
6、01 L0207 chelating 080717-1)三蛋白浓度测量(的目的是层析分离,所以没有做)1.按照 BCA 试剂盒(生工)提供方法进行实验;数据:数据处理:标准曲线方程:亲和后体积:ml;亲和后平均浓度:ug/ml;换盐后体积:ml;换盐后平均浓度:ug/ml;蛋白得率:%;四冻干(冻干的目的是浓缩,不做)1.首先,按计算后蛋白浓度,将蛋...
其中 α- 螺旋含量为 12%,β- 折叠 为 39%,β- 转角为 22%,无规则卷曲为 27%.复性的 Omp34 可使 HEK293 细胞发生凋亡.通过分子克隆技术成功获得了鲍曼不动 杆菌外膜蛋白 34,并解析出其二级结构,证实其可以导致 HEK293 细胞凋亡,这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白 34 的生 物学功能及其耐药机制...
羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d的原核表达、鉴定及纯化
结果 pET30a/ompW原核表达重组载体构建成功,基因测序鉴定,其在原核表达系统中高表达,表达产物分子质量单位约为43ku,与预期值相符.表达产物经8mol/L尿素和Tris-HCl处理纯化,得到高纯度的重组OmpW蛋白.结论成功构建鲍曼不动杆菌OmpW蛋白基因重组原核表达系统,并获得高纯度的重组OmpW蛋白,为研究鲍曼不动杆菌外膜蛋白W...
引物序 列 如下 : Ompl6F: CCGGAATTCATGCGCCGTATC— CAGTCGATTG 在 布鲁 菌不 同种 之 间具 有高度 的保 守性,动 物感 染 后可 以产生 针对不 同蛋 白 的特 异性抗体,引起 免疫 性保 护 反应 ],布鲁菌 外膜 蛋白16(Ompl6)属 于第 一 Ompl 6R:ACGCGTCGACTTACCGTCCGGC— CCCGTTGA 组 外膜 ...
鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A克隆表达及纯化
VeterinaryMedicine 布鲁菌外膜蛋白16纯化方法的改进 杨磊,张建坡,王相国,许勤,靳亚平,王爱华 (西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100) 摘要:为了获得布鲁茵外膜蛋白16(Ompl6),通过PCR技术扩增到Ompl6基因片段,将其连接到 pET32a载体,转化大肠埃希菌BL21,诱导其表达,应用改进的纯化方法,进行HIS一镍蛋白纯化柱纯化...
Omp25d蛋白克隆表达纯化研究羊布鲁菌外膜蛋白Omp25d基因的克隆,原核表达,以及纯化,根据羊布鲁菌M5株外膜蛋白Omp25d蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为650bp的目的基因片断,克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-Omp25d.在大肠杆菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化.用Western-blot分析方法鉴定GST-...