根据外源性基因在真核细胞中表达时间的长短我们可将转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两种。在瞬时转染的细胞中,外源基因得以表达但它们并不会整合到细胞的基因组中,也就不会被复制,适用的核酸类型主要包括质粒DNA、siRNA、miRNA和mRNA。细胞瞬时转染的外源基因表达时间有限,通常仅持续几天,直到外源基因在细胞
物理转染方法则涉及显微注射、电穿孔和基因枪等技术，需要专业设备且成本较高。相比之下，化学转染方法更为常用，主要利用阳离子脂质体和阳离子聚合物与核酸形成稳定复合物进行转染。在化学转染领域，PEI作为最受欢迎的阳离子聚合物转染试剂之一，以其简单的制备工艺、低廉的价格以及线状和枝状两种商业试剂的选择性，成...
在进行Lipo8000™试剂的转染操作前，为减小其对细胞的毒性影响，建议更换为含有抗生素的完全培养基。完成siRNA的转染后，为了确保有效的验证结果，至少需要等待48小时，通常在3至5天后，才能观察到明显的蛋白表达变化或RNA水平的降低。接下来，我们将介绍Lipofectamine ™ RNAiMAX转染方法。该方法专为siRNA和Stealth ™...
转染是指将外源核酸（DNA、RNA）人工导入真核细胞（如动物细胞、植物细胞）的过程，不依赖病毒感染。适用细胞：几乎所有真核细胞，尤其是动物细胞（如 HEK293、CHO 细胞）。核酸类型：质粒 DNA、mRNA、siRNA等，可实现瞬时表达（外源 DNA 不整合到基因组）或稳定表达（通过筛选整合到基因组的细胞）。方法：化学法：...
近年来,基因转染技术为靶向基因功能研究提供了高效工具,但蚊虫细胞系转染效率低、稳定性差等问题仍限制其应用。 本研究针对淡色库蚊胰蛋白酶基因(GenBank登录号:XP_040578392.1),设计特异性过表达载体,通过威尼德电穿孔仪优化转染条件,建立稳定表达该基因的Sf9细胞系。结合分子生物学...
CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过单向导sgRNA识别目的基因组序列,引导Cas9核酸酶对基因组进行有效切割,形成DNA双链断裂,通过细胞自身修复机制实现基因敲除、敲入、突变等,达到基因编辑目的。由于CRISPR-Cas9技术靶向灵活、编辑效率高、操作简便等特点逐步被应用于基因改造、药物开发、遗传病治疗等方面。
与传统的基因治疗方法相比,超声微泡介导基因转染技术具有出色的靶向性。通过调整超声的发射部位和参数,可以精确地控制微泡在体内的聚集位置。例如,在治疗脊髓损伤时,只需要将超声聚焦在脊髓损伤部位,超声微泡就会在该区域大量聚集,并将携带的基因释放到受损的脊髓细胞中。这种精准的靶向作用,不仅提高了治疗效果,还大大...
Neon 转染系统是对所有哺乳动物细胞(包括原代细胞、干细胞和难转染细胞)进行 CRISPR-Cas9 转染的优秀选择。 CRISPR 慢病毒转导 慢病毒转导利用慢病毒载体将核酸转移到细胞内。Cas9 慢病毒进入细胞后,CRISPR-Cas9 系统就会修饰细胞 DNA。随后,这种转基因宿主将继续表达基因修饰。慢病毒转导通常用于构建持续表达感兴趣的 ...
一、当前基因转染技术的局限性与挑战 尽管基因转染技术在过去几十年中取得了显著进展，但仍存在诸多局限性和挑战。首先，病毒载体作为基因转染的传统方法，虽然具有较高的转染效率，但其潜在的遗传毒性和免疫原性限制了其在临床应用中的广泛应用。其次，非病毒载体，如脂质体、纳米颗粒及物理方法，虽然具有较低的生物...
恶性疟原虫基因稳定转染技术是研究其致病机制及抗疟药物开发的重要工具。研究通过优化电穿孔参数、筛选标记基因及改进体外培养条件，实现了恶性疟原虫红细胞内期的高效转染。实验采用威尼德电穿孔仪与分子杂交仪，结合某试剂完成质粒递送与基因整合验证。结果显示，转染效率提升至15%，阳性克隆筛选周期缩短至3周，为后续功能...