1. siRNA的设计是决定RNAi实验成败关键性的第一步。 并非每个siRNA都能有效引发基因沉默。和引物设计一样,设计有效的siRNA也有一些经过前人经验总结出的规则,而且这些规则随着对siRNA研究的深入也在不断完善之中。有一些开放的免费在线工具可用。付费的软件成功率比较高,3个保证中2个。 2. siRNA的反义链3'端最好...
病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)是指携带目的基因片段的病毒侵染植物后,随着病毒的复制和转录而特异性的诱导序列同源基因mRNA降解或被甲基化等修饰,从而引起植物内源基因沉默、引起表型或生理指标变化,进而根据表型变异研究目标基因的功能。 VIGS是根据植物对RNA病毒防御机制发展起来的一种用以表征...
1.明确目标基因:首先要准确确定需要沉默的目标基因,这需要对研究目的和相关生物学背景有深入的了解。 2.选择合适的基因沉默技术:比如RNA干扰(RNAi)等,不同技术对引物设计有不同要求。 3.收集相关基因信息:包括基因序列、结构特点等,这些信息可以从公共数据库或相关文献中获取。 4.准备设计软件和工具:有一些专门用于...
普遍来说,研究小麦基因功能的很多出发点都会从VIGS入手。VIGS做得好,很多后续就会方便很多。VIGS要是没有太过直接的结果,往往会不太自信。而研究生短短三年的时间,真正做实验的时间也就两年。而作为实验开端的VIGS实验,差不多就需要三个月时间操作。所以每一步都应该慎重。也不仅仅VIGS吧,很多实验,慢慢来,反而快...
大约300-1000bp片段效果较好。干扰信使RNA当然不能用内含子了，还有序列不能有二级结构。
看了专门介绍的protocol,要求上下游的引物要跨越siRNA的target位点。但是有的文献上也不是这么设计的,就是还是mRNA的保守位置。因为siRNA切割mRNA之后,随着时间的延长和循环整条mRNA都会降解。所以有点糊涂了,求亲自做过的大神解答。我是细胞转染siRNA之后继续培养24小时,收细胞提总RNA的。 返回小木虫查看更多分享...
不需要避开。
大约300-1000bp片段效果较好。干扰信使RNA当然不能用内含子了，还有序列不能有二级结构。
普遍来说,研究小麦基因功能的很多出发点都会从VIGS入手。VIGS做得好,很多后续就会方便很多。VIGS要是没有太过直接的结果,往往会不太自信。而研究生短短三年的时间,真正做实验的时间也就两年。而作为实验开端的VIGS实验,差不多就需要三个月时间操作。所以每一步都应该慎重。也不仅仅VIGS吧,很多实验,慢慢来,反而快...
大约300-1000bp片段效果较好。干扰信使RNA当然不能用内含子了，还有序列不能有二级结构。