1、启动子区域的精准选择 在确定启动子区域时，可借助文献资料或者生物信息学工具，例如 Promoter 2.0、JASPAR 等。重点明确核心启动子区域，像 TATA 框、CAAT 框以及转录起始位点等。同时，要保证扩增的启动子片段能够涵盖所有的调控元件，例如顺式作用元件、增强子或者抑制子区域，这对后续实验结果有着重要影响。2、合适载体的挑选
之前我们介绍的抗生素抗性基因可以帮助防止质粒丢失,简化克隆鉴定;复制起点可以帮助质粒自我复制,维持一定的拷贝数。下一步则需要质粒能够正确的表达我们的目的基因,下面我们谈谈解决这个问题需要考虑的第一个因素——启动子。 01启动子 启动子这个术语其实指的是启动子(RNA聚合酶结合位点)和操纵子(响应元件)这两部分的...
启动子报告克隆在GLuc报告基因上游插入一段1.2~1.5 kb的序列,这段插入序列与基因转录起始位点(TSS)上游大约1.5kb到下游200bp之间的5’侧翼序列一致,可以通过观察荧光素酶的活性来研究启动子对基因的调节作用。…
启动子与GUS基因连接 🔗 然后,利用DNA重组技术,将克隆得到的启动子序列与GUS基因进行连接。这一步通常通过酶切、连接酶处理等步骤实现,确保启动子与GUS基因之间形成正确的读码框。简单来说,就是让启动子和GUS基因“手拉手”。 载体转化 🔬 将构建好的启动子-GUS融合表达载体转化到宿主细胞中。常用的转化方法包...
基因启动子克隆是获取基因启动子序列并将其插入到适当载体中的过程，以下是其一般流程：准备工作：确定目标基因：明确要克隆启动子的基因，了解其在基因组中的位置及相关信息。查找基因序列：通过GenBank等数据库获取目标基因的全序列，确定其启动子区域的大致位置。通常，启动子位于基因转录起始位点上游，一般在 -1000bp...
克隆启动子的方法 克隆启动子的方法主要有以下几种: 1.利用启动子探针载体筛选启动子:启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体,包含转化单元和检测单元。其中,转化单元含复制起点和抗生素抗性基因,用于选择被转化的细胞;检测单元则包括一个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点...
启动子克隆 启动子是基因表达调控的重要顺式元件,它和RNA聚合酶以及其它一些反式调控因子的作用调控特定基因的表达。是我们植物基因研究的重要组成部分。 植硕生物有着多年植物启动子克隆和启动子活性以及互作研究经验,为科研工作者提供快捷方便的服务。
GLuc-ON™ 启动子克隆采用分泌型的Gaussia荧光素酶(GLuc)作为报告子,可在活细胞中对超过20,000种人源启动子进行实时活性分析。 可直接用于细胞转染的GLuc-ON™ 启动子克隆在GLuc报告基因上游插入一段1.2-1.5 kb的序列。这段插入序列与位于特异人源基因转录起始区上游大约1.5kb到下游200bp之间的5'序列*。由于这...
启动子克隆概述 孙晓红 1 陈明杰 2* 潘迎捷 2 ( 1 南京农业大学资源与环境科学学院, 南京 210095; 2 农业部食用菌遗传育种重点开放实验室, 上海市农业遗传育种重点实验室, 上海市农业科学院食用菌研究所, 上海 201106) 摘要: 启动子是基因表达调控的重要顺式元件, 也是基因工程表达载体的一个重要元件。 笔者阐述...
启动子克隆长度原则的核心观点是:启动子克隆的长度应该足够包含关键的调控元件以确保准确的基因表达调控。具体来说,启动子克隆的长度应该包括以下的要点: 1.转录起始点(TSS)附近的核心区域,这是基因表达起始的关键区域,往往包含着调控因子结合位点和转录因子结合位点。 2.转录因子结合位点的多态性,即基因启动子区域的多...