Red/ET 同源重组技术(Red/ET recombineering)是由来源于大肠杆菌 λ 噬菌体的蛋白对 Redα/Redβ 或来源于 Rac 原噬菌体的蛋白对 RecE/RecT 所介导的基于短同源臂(40–50 bp)的同源重组技术,能对宿 主 DNA 序列进行快速、高效、精确的修饰和操作。 1998 年,Zhang 等发现大肠杆菌(Esch
同源重组基因敲除技术是将同源DNA片段导入受体细胞,利用同源DNA片段的互换,用其他DNA片段在原有位置替代靶基因,从而实现基因的敲除。米曲霉产生的曲酸具有抗菌性、抗氧化性等抗逆能力,具有重要的应用价值。为提高米曲霉产曲酸能力,科研人员用同源重组基因敲除技术成功敲除了米曲霉3.042菌株中的msn2基因,获得高产的g-5菌...
同源重组技术原理：① 同源重组技术的基础在于生物体细胞内存在的同源序列。所谓同源序列，简单理解就是在不同的DNA分子中，核苷酸序列具有高度相似性的部分。这就好比两个人虽然有不同的外貌特征，但在某些基因片段上有着极为相似的结构。比如在小鼠和人类的基因中，关于血红蛋白合成的部分基因序列就有一定程度的相似...
同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。图1是科研人员利用该方法对大肠杆菌tacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tetr是四环素抗性基因,sacB基因(2071bp)是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题:(1)过程①PCR除需要加入Taq酶...
同源重组法构建质粒是将目的DNA片段与载体DNA片段的两端引入相同的特定序列,通过无缝克隆或重组酶克隆技术,使两个具有完全相同的核苷酸序列之间发生交换,从而实现目的基因与载体的重组。重组反应不需要对于目的基因进行酶切,可以选择载体上的任意酶切位点。 实验步骤 ...
同源重组法可以用于制造基因突变、研究蛋白质结构和功能、制造转基因生物等方面。下面将从原理、步骤、应用等方面详细介绍同源重组法。 一、原理 同源重组法是利用两个相似但不完全相同的DNA序列进行交换来实现基因突变或转移的技术。其原理是利用同源性使两个DNA分子在某些区域上发生配对并形成交叉点,然后通过切割和...
再谈谈技术流程。第一步是载体构建，需要设计并合成包含同源臂、筛选标记以及敲除元件的重组载体，可供选择的常用载体有质粒、细菌人工染色体，也就是 BAC，还有病毒载体。第二步是将载体导入细胞，可运用电穿孔、显微注射、病毒感染或者化学转染等多种方法，把载体送进靶细胞内部，这些靶细胞涵盖胚胎干细胞、原代细胞，...
同源重组技术结合tetr-sacB双重选择系统可对基因进行敲除与回补,研究基因的功能。如图1是科研人员利用该方法对大肠杆菌LacZ基因进行敲除与回补的相关过程,其中tetr是四环素抗性基因,sacB基因(2071bp)是蔗糖致死基因,LacZ基因表达产物能将无色化合物X-gal水解成蓝色化合物。请回答下列问题。 限制酶 EcoRⅠ BamHⅠ HindⅢ...
RedET同源重组技术的核心是一种诱导目标基因与酵母染色体同源重组的DNA修复机制。该修复机制主要基于酵母中两个DNA重组酶RecE和RecT的相互作用。RecE酶在酵母中识别并切割目标基因与酵母染色体之间的同源序列,形成单链切口。然后RecT酶结合在切口上,介导目标基因与酵母染色体的DNA重组。最后,通过酵母DNA修复机制,目标基因与...
“同源重组技术”逐渐受到科研人员的欢迎,如翌圣Hieff Clone®一步法快速克隆技术。相比之下,同源重组技术操作更加简单,不受到酶切位点的限制,可一次进行多个片段的拼接,大大的提高了克隆效率。虽然同源重组技术操作简单,但毕竟实验过程是环环相扣的,一旦某个细节处理不好,都可能导致实验失败。为此,小编精心整理了...