同源序列法克隆的主要步骤如下: 1. 设计引物:根据已知目的基因的序列,设计一对引物(即寡核苷酸片段),其中一个引物具有与目的基因的5'端相互匹配,另一个引物具有与目的基因的3'端相互匹配。 2. 提取模板DNA:从包含目的基因的源生物体中提取总DNA或特定组织/细胞中的DNA作为模板。 3. 聚合酶链反应(PCR)扩增:在PCR反应中
所谓同源序列,简单地说,是指从某一共同祖先经趋异进化而形成的不同序列。必须指出,相似性(similarity)和同源性(homology)是两个完全不同的概念。相似性是指序列比对过程中用来描述检测序列和目标序列之间相同DNA碱基或氨基酸残基顺序所占比例的高低 ...
同源序列法克隆目的基因是一种利用已知的同源序列来寻找和克隆特定目的基因的方法。同源序列指的是在不同物种或同一物种中不同基因间具有部分相似性的DNA序列。这些同源序列在进化过程中保留下来,其存在可以起到指导相同或类似基因的功能和表达的作用。因此,通过利用已知的同源序列,研究人员可以迅速准确地寻找并克隆目的基...
【秘】一步法同源重组技术的关键在于同源重组酶。它兼具外切酶活性、DNA聚合酶活性及连接酶活性。 外切酶活性:该酶活性能特异性地识别载体和插入片段末端的15-20bp的同源序列,并沿着5'至3'方向,切割双链DNA,从而产生粘性末端,粘性末端的碱基在50℃作用下进行互补配对,将具备同源序列的载体与插入片段“融合”。 DNA...
也存在类似结构域， 90 年代， 许多研究者便提出了利用同源序列法快速克隆抗病基 因的设想，其基本思路便是 依据这些结构域中的高度保守区域，设计特异性的简并引物， 通过 PCR 扩增 R 基因同源序列（ Resistance gene analogs, RGAs ），最后利用这些 RGAs 来快速分离 R 基因。
同源序列法是一种常用的基因克隆方法,通过在一个已知基因的上下游区域找到相同的DNA序列,然后利用PCR或限制酶技术将目标基因从细胞中扩增、截取并插入到适当的质粒载体中。本文将介绍利用同源序列法克隆基因的基本步骤。 二、材料与设备准备 1. 目标基因的DNA序列 - 确定目标基因的DNA序列,并设计引物 2. PCR试剂盒...
同源序列法分离 RGAs 的过程快速、简捷， 并且应用上没有限制，因而能够在广泛植物中得到普遍应用。 目前，已经从大豆（ Kanazinet al., 1996 ）、豌豆（ Timmerman-Vaughan et al., 2000 ）、马铃薯 ( Leister et al., 1996) 、番茄 (Zhang et a1., 2002) 、柑橘 (Deng et al., 2000) ...
近几年来,采用同源序列法克隆抗病基因已得到 这类基因编码蛋白的近N端有果蝇 TOLL白细 了广泛应用。 胞介素一1信号区域 (TIR),近 C端 由LRR组成 ,中 绝大多数植物抗病基因所编码的蛋白具有极其 问为 NBS。这类蛋白一般存在于胞质 中,NBS结构 保守的结构域 ,编码这些保守结构域的抗病基因序 暗示它们在发挥...
为处理海量的序列数据,基于蛋白质语言模型和向量比对,香港中文大学李煜团队研发了一种无需对齐,超快速且高度灵敏的方法DHR(Dense Homolog Retrieval),用于在海量数据中检测低相似度同源序列,并提高我们对蛋白质进化、结构和功能的认识。 研究结...