• Tag-lite 荧光标记配体: 经过验证的与GPCR结合的特异性配体,其上标记HTRF受体染料(红色或绿色)。 应用实例 多巴胺D2受体配体结合实验 进行了配体Kd值检测和受体配体竞争抑制实验,结果如图5、图6所示。 图5:多巴胺D2受体配体Kd测量实验 构建SNAP与多巴胺D2受体的表达载体,瞬时转染后,加入Tb标记的底物,得到GPCR...
实验步骤一般包括以下几个关键步骤: 1.准备标记配体:将配体与放射性同位素结合,这通常涉及到将配体与放射性同位素联结的化学反应。常用的放射性同位素包括^3H(氚)和^125I(碘)等。此步骤需要进行放射性安全操作。 2.孵育样品:将受体样品与标记配体一起在适当的缓冲液中孵育。孵育条件(温度、时间等)需根据具体受体...
受体结合实验常用一定配体检测受体的结合情况。受体动力学的研究方法有:功能实验分析法,放射配基结合方法,亲和色谱法,交界面光学方法,核磁共振技术,毛细管电泳(capillary electrophoresis)方法,液闪接近测定技术。 衡量受体的存在一个主要标志是受体的饱和性,即绘制出特异性结合的饱和曲线。原理是根据活性物质与标记的活性物...
请设计一个实验研究受体与配体结合的特异性ACTH-|||-胰高血糖素-|||-胰岛素-|||-非放射性激素的浓度(1og)克采用非放射性标记的底物同放射性标记的配体竞争受体的结合位点的方法,原理是: 如果结合是特异性的话,只有信号分子能够同受体结合,而与信号分子无关的分子则不能同受体结合。例如,放射性标记的胰岛素与...
RBA用放射性核素来标记配基，与相应的受体进行特异性结合反应，可对受体的性质进行定性和定量的分析。1、定性RBA：是通过反应的量效关系的变化来判断受体的类型，单位点或多位点结合式，及受体与配体结合的特点，反应的可逆性、协作性等。2、定量RBA：是在已知配体与受体反应性质的基础上，通过结合反应，给出一定量...
演示文稿放射性配体与受体结合分析实验方法.ppt,饱和曲线(saturation curve) 1)饱和曲线 受体数量一定,当配体(一般是不同浓度体积的放射性配体与固定数量的非标)的浓度从零开始上升时,形成的复合物也逐渐增多。但由于受体数量有限,又是可逆反应,因此[RL](受体配体复
RBA用放射性核素来标记配基，与相应的受体进行特异性结合反应，可对受体的性质进行定性和定量的分析。1、定性RBA：是通过反应的量效关系的变化来判断受体的类型，单位点或多位点结合式，及受体与配体结合的特点，反应的可逆性、协作性等。2、定量RBA：是在已知配体与受体反应性质的基础上，通过结合反应，给出一定量...
第五节放射配体受体结合实验方法与技术 一、基本概念 1、受体(receptor)一类介导细胞信号转导的功能蛋白质,可与周围环境中微量化学 物质发生特异性结合,通过信息放大系统,触发后续的生理或药理效应。 2、配体(ligand)能与受体特异结合的物质,如神经递质、药物或激素等。 3、判断受体的标准真正的受体必须具备:饱和性、...
关键词:放射性配体受体结合法;经验介绍;方法小结 放射性配体受体结合(Radioligandreceptorbinding assays,RRA)实验广泛用于测定受体的密度和亲和力, 但是对初学者来说,要在本实验室建立RRA系统时, 由于没有关于实验实际操作方面详细的介绍而倍感苦 恼,现根据我们实验室多年的经验,将部分内容方法操 ...
月,受体不失活[122] 。2降低非特异性结合的方法 我们用组织提取受体进行3 H 2G ABA (γ2氨基丁酸实验时,吸附在滤纸上的游离型标记配体的含量较多,非特异性结合很高,可考虑如下几方面降低其含量: (1加样顺序:最好先加膜受体饱和管以壁减少 3 H 2G ABA在管壁上的吸附。若先加3 H 2G ABA则非特异 性结...