接下来,我将介绍冲洗反相色谱柱的具体方法: 1.初次使用的柱子:当我们第一次使用反相色谱柱时,需要进行柱子的初次洗涤。首先,将冲洗液(一般为纯溶剂)通过柱子中的流动相系统进行冲洗。冲洗液的流速应尽可能高,以快速清除柱子中的残留物和杂质。持续冲洗柱子直到洗液完全清澈为止。 2.样品切换:当我们从一个样品切换...
反相色谱柱通常使用乙腈或甲醇水溶液作为流动相,为了保证反相色谱柱的使用寿命和稳定性,在样品分离前应对反相色谱柱进行冲洗。具体方法如下: 1. 第一次使用前的冲洗:用纯水冲洗3-5倍柱子的体积,然后再使用纯溶剂(如乙腈或甲醇)冲洗2-3倍柱子的体积。这样能有效去除柱子内部的空气和杂质,减少染料、油脂等物质...
如果怀疑柱子被严重污染,还可用二甲亚砜(DMSO)或 二甲基甲酰铵和水按50:50的比例混合,以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。 成功再生反相柱子是一个非常耗时的过程,溶剂冲洗序列可以编成一个梯度洗脱的程序自动进行,以方便过夜操作。 清洗硅胶反相柱上的蛋白质残留 如果是生物物质如血浆或血清等积累在反相色谱柱上,...
1. 使用纯水或缓冲液对色谱柱进行最后的冲洗,以去除残留的有机溶剂。 2. 将色谱柱保存在适当的溶剂中,以防止柱内填料干燥和细菌滋生。 3. 记录冲洗的日期、使用的溶剂以及冲洗过程中的观察结果,以便日后参考和分析。 通过正确的冲洗方法,可以有效地去除反相色谱柱内的杂质和残留物,...
一、反相色谱柱堵塞的原因 反相色谱柱的堵塞是由于样品残留物、溶剂组分或杂质沉积在柱内和柱外管壁等形成的。反相色谱柱的堵塞会严重影响色谱分离效果和峰形,因此及时清洗和换柱是非常必要的。 二、正确的冲洗方法 ...
反相色谱柱一般都是采用C18柱,它是一种疏水性柱,常用的冲洗液组合为甲醇和水。为了更好地冲洗反相色谱柱,可以在甲醇和水中加入适量的磷酸或乙酸等缓冲溶液。具体的冲洗步骤如下: 1.用去离子水先冲洗反相色谱柱5-10分钟,去除残留样品; 2.将柱温升至50℃,用甲醇和水的混合液(比...
1.预冲洗:使用纯乙腈或含少量酸性缓冲液的乙腈进行反相色谱柱预冲洗,可以去除大多数的常规杂质,同时也可以活化柱子。 2.样品冲洗:根据样品的性质选择相应的冲洗液进行反相色谱柱样品冲洗。在进行样品冲洗时,需要根据样品的含量和复杂度合理选择冲洗液的浓度和数量,进行充分的冲洗。 3.纯化冲洗:在进行单一化合物纯化时...
一、反相色谱柱堵塞的原因 反相色谱柱的堵塞是由于样品残留物、溶剂组分或杂质沉积在柱内和柱外管壁等形成的。反相色谱柱的堵塞会严重影响色谱分离效果和峰形,因此及时清洗和换柱是非常必要的。 二、正确的冲洗方法 正确...
反相色谱柱一般都是采用C18柱,它是一种疏水性柱,常用的冲洗液组合为甲醇和水。为了更好地冲洗反相色谱柱,可以在甲醇和水中加入适量的磷酸或乙酸等缓冲溶液。具体的冲洗步骤如下: 1.用去离子水先冲洗反相色谱柱5-10分钟,去除残留样品; 2.将柱温升至50℃,用甲醇和水的混...
6、20倍柱体积 水:乙腈=95%:5% (可与步骤1保持相同的比例) 7、用所需的流动相比例重新平衡色谱柱 关于色谱柱的冲洗再生,基本上都是个性化的,也有很多相关文章,每支色谱柱的实际情况都会有所不同,适的再生条件需要经过实际摸索和调整。 在色谱柱冲洗时,很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果...