检查双链 RNA 的长度是否符合预期。进行双链 RNA 的退火处理。控制退火的温度和时间。去除未反应的原料和杂质。对双链 RNA 进行浓缩。 评估双链 RNA 的纯度。利用电泳技术分析双链 RNA 的特性。标记双链 RNA 以便后续检测。调整反应缓冲液的成分。确保合成环境的无菌状态。验证双链 RNA 的结构稳定性。比较不同合
RNA病毒感染宿主过程中合成。 许多RNA病毒在其生命周期中会合成双链RNA中间体。以正链RNA病毒为例,病毒的基因组RNA本身就可以作为信使RNA(mRNA),直接在宿主细胞的核糖体上翻译出病毒复制所需的蛋白质,其中包括RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP)。 RdRP以病毒的正链RNA为模板,合成与之互补的负链RNA,这样就形成了双链RNA中间...
化学合成法合成RNA的极限长度在一百个核苷酸左右,目前制备长链RNA的唯一方法是上世纪80年代Uhlenbeck等建立的体外转录,即利用天然的RNA合成机器-DNA依赖的RNA聚合酶,在体外从带有相应转录启动子序列的DNA模版上反复转录线性扩增产生所需的RNA...
而RDR2直接以单链RNA为模板,合成双链RNA。 “这是一个颠覆了之前设想的精巧结构,简洁而高效。”王佳伟形容说,“以前我们认为,需要先在Pol IV合成一条链,再从外部进入RDR2合成双链。但现实中Pol IV和RDR2就像是自动双面打印机,一面打印完,不需要拿出来翻面,而是直接在内部打印了另一面。” 这一发现提出了...
上述特殊的作用机制能够保证 Pol IV合成的单链RNA直接传递至RDR2,防止单链RNA的降解,另外,Pol IV-RDR2经过一轮双链RNA合成之后,又回到转录起点,能够开始下一轮双链RNA合成,高效地实现了双链RNA的扩增。 该研究首次揭示了真核生物第四个多亚基RNA聚合酶的三维构造,阐明了两种RNA聚合酶Pol IV和RDR2协作转录的...
中国科学院分子植物科学卓越创新中心张余研究团队和王佳伟研究团队以及浙江大学冯钰团队合作,解析了Pol IV-RDR2蛋白复合物的三维结构,并提出了Pol IV-RDR2以双链DNA为模板合成双链RNA的独特分子机制。相关论文2021年12月24日在《科学》以Research Article形式发表。
Pol IV合成车间的工作是以双链DNA为模板合成单链RNA，合成出的单链RNA产物就可以通过内部通道直接传送到RDR2的合成车间，从而RDR2能够直接以单链RNA为模板，合成双链RNA。据此，研究人员提出蛋白质机器Pol IV- RDR2复合物就像一个高效合成双链RNA的工厂，以双链DNA为模板，在蛋白机器内部传递单链RNA中间产物，连续...
参考相关文章) MEGAscript™ RNAi Kit 合成大量纯净的双链 RNA 是 RNAi 实验成功的关键。这个基于专利 的转录高产技术的产品正是为大量合成用于 RNAi 实验的 dsRNA 而 优化的。试剂盒要求用两端带有 T7 启动子序列的目的基因作为模板 (200nt 以上,模板可以是质粒载体上的,也可以是用带有 T7 序列 的引物扩增...
中国科学家揭开植物中双链RNA合成机制的奥秘 今天凌晨,中科院分子植物科学卓越创新中心张余研究团队、王佳伟研究团队,以及浙江大学冯钰团队合作在《科学》杂志发表研究成果,解析了真核生物第四个RNA聚合酶Pol IV的结构,揭开了双RNA聚合酶复合物的独特构造和协同工作机制,提出了转录蛋白质机器的新工作模式。该研究成果是...
2021年12月24日,中国科学院分子植物科学卓越创新中心张余研究团队和王佳伟研究团队以及浙江大学冯钰团队合作在《科学》上发表研究论文,研究解析了Pol IV-RDR2蛋白复合物的三维结构,并提出了Pol IV-RDR2以双链DNA为模板合成双链RNA的独特分子机制。 张余研究员正在分析蛋白结构 ...