双酶切反应体系及反应条件双酶切反应体系是指在分子克隆过程中,使用两种不同的限制性内切酶同时切割目的基因和载体DNA,以获得正确的连接位点,而反应条件包括适宜的温度、pH值、酶浓度和反应时间等。©2022 Baidu |由 百度智能云 提供计算服务 | 使用百度前必读 | 文库协议 | 网站地图 | 百度营销 ...
双酶切的实验步骤 1、在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近，必须注意酶切顺序。因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的，则必须先切，否则就可能造成酶切失败。2、回收PCR产物：回收的PCR产物片段=1：10 ，一般取前者0.0...
由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度.如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加...结果一 题目 Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?用Xho1和Nde1对载体质粒和目的片段分...
反应体系应该指的是，两种酶同时使用时，应该用的buffer系统，且每一种酶的用量，DNA的用量，以及保证酶...
(PS:反应体系中要用到BSA)。 谢谢大家了~~ 网友 1 最佳答案 回答者:网友 由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer,对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1...
请教双酶切反应体系的建立网友 1 最佳答案 回答者:网友 做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很来自容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。我的方法是培基高温消毒后放在烤箱里,烤箱一般温度为55...
1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度反应,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不... Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?? 由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA,请你仔细核对,两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄...
酶1 0.5ul酶2 0.5ulbuffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA水补足 20ul30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度.注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中.
由这两种酶组成的双酶切体系并不需要添加BSA，请你仔细核对，两种酶的最适反应温度均为37摄氏度所以双酶切温度应为37摄氏度。如果选用TaKaRa的限制性内切酶那么Buffer应使用H Buffer，对于50 μl的酶切体系而言应分别加入1.5 μl的Xho1和Nde1并且加入5 μl的10×H Buffer（使得酶切体系中的Buffer...
试题来源: 解析 酶各加1.5 ul,底物加入在2ug,37℃,1*H Buffer+BSA,酶切12小时。 结果一 题目 takara公司的EcoR1和Not1 50μl双酶切反应体系的配制? 答案 2017-10-11相关推荐 1takara公司的EcoR1和Not1 50μl双酶切反应体系的配制?反馈 收藏