双荧光素酶报告系统(dual luciferase reporter):萤火虫荧光素酶(Firefly luciferases)和海肾荧光素酶(Renilla luciferases),由于其不同的进化起源,具有不同的酶结构和底物需求。 1.2 萤火虫荧光 1.2.1 萤火虫荧光反应 萤火虫荧光素酶是一种61kDa的单体蛋白,不需要翻译后加工就能产生酶活性, 因此,它在翻译后立即发挥...
Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基因的下游,以...
实验原理 4Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基因...
双荧光素酶是在单荧光素酶的基础上发展起来的,双荧光素酶报告基因检测系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶两部分。海肾荧光素酶作为转染的内参,可以归一化实验数据。 理想的报告基因应该具有以下几个基本特点: ①具有已知且可被克隆验证的全部基因序列; ②报告基因的表达产物在检测...
Dual Luciferase Reporter实验步骤 5 以烟草为材料进行Dual Luciferase Reporter的实验步骤: 1)构建相应的载体。 2)挑取转化有重组质粒的农杆菌单菌落,接种到2 mL LB液体培养基(添加相应抗生素)中,28℃ 220 rpm培养过夜。 3)农杆菌培养至OD600为1.0,1700× g离心5 min收集菌体后,用1/2MS液体培养基清洗菌体2次...
植物双荧光素酶报告基因实验步骤 引言: 植物双荧光素酶(dual-luciferase reporter gene)是一种广泛用于研究基因表达和调控的实验技术。这种技术主要基于荧光素酶酶促反应原理,通过测量两种荧光素酶的活性来评估靶基因的调控效应。本实验将详细介绍植物双荧光素酶报告基因实验的步骤。 材料: 1.载体DNA:包含荧光素酶的...
撰写文章时，该实验可引用以下参考文献1）miRNA与mRNA相互作用Clément T, Salone V, Rederstorff M. Dual luciferase gene reporter assays to study miRNA function. Methods Mol Biol. 2015;1296:187-198.Wang WQ, Wang J, Wu YY, et al. Genome-wide analysis of coding and non-coding RNA reveals a ...
/ 双荧光素酶基因报告系统(Dual-Luciferase reporter assay)/ 双荧光素酶报告基因检测系统在细胞中同时表达萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶,两者可催化各自的底物发生氧化作用产生生物荧光,以萤火虫萤光素酶为核心reporter,海肾荧光素酶作为内参(注1),构建研究对...
双荧光素酶报告基因检测(Dual- Luciferase reporterassay,DR)已成为研究转录因子参与基因调控的有效手段,通过对启动子DNA片段的分析,验证启动子结合元件的反式激活能力,探讨转录因子在信号转导中的分子机制,比较常见的组合是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶,萤火虫荧光素酶作用于甲虫荧光素,而海肾荧光素酶在氧的存在下...
双荧光素酶报告（Dual-Luciferase Reporter）实验是一种常用的遗传调控元件研究手段，通过构建包含荧光素酶基因的报告质粒，如将感兴趣的基因调控元件插入萤火虫荧光素酶（firefly luciferase）上游，以及加入海肾荧光素酶（Rinilla luciferase）作为对照，来评估基因表达变化。这项技术起源于1990年，经过30年的...