1.1双荧光素酶报告系统 双荧光素酶报告系统(dual luciferase reporter):萤火虫荧光素酶(Firefly luciferases)和海肾荧光素酶(Renilla luciferases),由于其不同的进化起源,具有不同的酶结构和底物需求。 1.2 萤火虫荧光 1.2.1 萤火虫荧光反应 萤火虫荧光素酶是一种61kDa的单体蛋白,不需要翻译后加工就能产生酶活性, ...
双荧光素酶(Dual-Luciferase Reporter Assay,简称DLRA)是一种用于测定基因表达调控和信号传导通路的活性的常用技术。该技术利用双荧光素酶作为报告基因和内参基因,通过测定荧光素酶和Renilla荧光素酶的活性来研究基因的转录调控和信号通路的激活情况。本文将介绍双荧光素酶报告的原理、操作步骤和应用范围。 1.原理。 双...
技术分享第十七期 | 双荧光素酶报告基因检测 双荧光素酶报告基因检测系统是采用萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)和海肾荧光素酶(Rellina Luciferase)组成双荧光素酶报告基因实验系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)。实验过程中萤火虫荧光素酶与基因表达的特定实验条件有关,海肾荧光素酶用来做转染的内参,以校正不同...
Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基因的下游,以...
摘要:双荧光素酶报告系统(Dual Luciferase Reporter Assays, DLRA)是一种广泛应用于生物科学研究中的细胞功能检测技术。通过分析荧光素酶的活性,可以评估细胞内信号通路的激活情况,从而研究基因表达调控、细胞增殖、细胞凋亡等多种生物学过程。本文将对双荧光素酶报告数据分析的方法、注意事项以及结果解读进行详细阐述。
双荧光素酶报告基因检测系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)由萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成。两种荧光素酶无需修饰,只要正常转录即具有活性,其中海肾荧光素酶作为转染的内参,来减少孔间细胞数量和转染效率对实验结果的影响,通过特定的荧光检测仪检测荧光量来判断酶的活性,进而反映基因间的关系。
双荧光素酶报告系统(dual luciferase reporter assay system)是一种常用的生物学实验技术,用于研究基因调控、信号转导通路、蛋白质相互作用等生物学过程。该技术利用荧光素酶和甲基荧光素酶作为报告基因,通过测定其荧光素酶活性来分析靶基因的表达水平和调控机制。本文将介绍双荧光素酶报告系统的原理、操作步骤和应用范围...
双荧光素酶是在单荧光素酶的基础上发展起来的,双荧光素酶报告基因检测系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)包括萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶两部分。海肾荧光素酶作为转染的内参,可以归一化实验数据。 理想的报告基因应该具有以下几个基本特点: ①具有已知且可被克隆验证的全部基因序列; ...
双荧光素酶报告（Dual-Luciferase Reporter）实验是一种常用的遗传调控元件研究手段，通过构建包含荧光素酶基因的报告质粒，如将感兴趣的基因调控元件插入萤火虫荧光素酶（firefly luciferase）上游，以及加入海肾荧光素酶（Rinilla luciferase）作为对照，来评估基因表达变化。这项技术起源于1990年，经过30年的...
双荧光素酶报告基因检测系统（Dual-Luciferase Reporter Assay）由萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成。其中，萤火虫荧光素酶在底物充足时，产生的荧光量与酶活性成正比。海肾荧光素酶则作为转染的内参，以减少细胞数量和转染效率对实验结果的影响。通过特定荧光检测仪检测荧光量，从而判断酶的活性，反映基因间...