【考点】双脱氧链终止法的原理和方法。【解析】英国剑桥大学分子生物学实验室的F.Sanger在1977年发明了用DNA聚合酶的双脱氧链终止原理测定DNA的序列的方法。由于这种方法要求使用一种单链DNA模板和一种适当的DNA引物,因此也被称为引物合成法或酶催引物合成法。【答案】原理:双脱氧的核苷酸是人造的分子,这种分子糖环...
答:双脱氧链末端终止法测序原理是利用DNA的体外合成过程。反应体系中的核苷酸单体除了4种dNTP外,还有ddNTP。反应过程中ddNTP虽然可以与正在延伸的DNA链的末端形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中,但它们本身没有-OH,不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键,从而使正在延伸的DNA链在此终止。据此原理分别设计四个反应,每一反应中...
DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接,合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP与普通dNTP不同,它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中,但由于没有3’羟基,不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键,因此,正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成...
双脱氧链终止法的原理是通过在DNA复制过程中引入放射性同位素标记的双脱氧核苷酸(ddNTP)来终止DNA链的延伸,从而测定DNA序列。以下是详细说明: 基本原理: 在DNA复制过程中,使用四种特殊的脱氧核苷酸,其中一种是放射性同位素标记的双脱氧核苷酸(ddNTP)。 ddNTP的脱氧核糖上不含3'-羟基,因此在DNA链的延伸过程中不能形成...
双脱氧链终止方法的基本原理是核酸模板在四种单脱氧碱基存在的情况下进行复制或转录，当四种脱氧碱基按一定比例加入四种单脱氧碱基时，当双脱氧碱基被插入到链末端时，其长度就会停止，而与单脱氧碱基结合的片断可以持续延伸。然后，在每个反应系统中，就形成了一系列具有不同长度的 DNA序列，它们的末端是5′，末端是双...
1.双脱氧链终止法基本原理 在DNA聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸存在的情况下,如果在四管反应系统中分别按比例分别加入四种双脱氧核苷三磷酸,则当双脱氧核苷三磷酸被加入到链末端时,这一链就会停止伸长,而单脱氧核苷三磷酸链末端的片段也可以...
双脱氧链终止法是一种基因组测序技术,它的原理是利用双脱氧核苷酸(dNTP)来终止DNA片段的扩增,这种技术可以帮助研究人员确定特定DNA序列的结构和组成。当DNA片段在反应液中扩增时,DNA聚合酶会把双脱氧核苷酸(dNTP)添加到DNA片段的3'端,当添加的dNTP与DNA片段的链终止碱基不匹配时,DNA聚合酶便会停止扩增。因此,双脱氧...
原理是采用核苷酸链终止剂—2,,3,-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH,一旦参入到DNA链中,此DNA链就不能进一步延长。(5分)根据碱基配对原则,每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时,就有两种可能性,一是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止;二是参入dNTP...
双脱氧链终止法是DNA测序的基本方法，其原理是：核酸模板在核酸聚合酶、带有3′-OH末端的单链核苷酸引物、四种dNTP存在的条件下复制或转录时，如果在反应系统中分别引人单一种类的ddNTP（即2、3双脱氧核苷三磷酸，在脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键），只要ddNTP掺入链端，该链...