Pet28a原核表达载体的构建特点是将多个功能元件组合在一起,以实现高效的蛋白质表达。主要包括启动子、编码序列、标签序列和终止子等。 Pet28a的启动子是一段能够识别并与细菌RNA聚合酶结合的序列,用来启动基因的转录。细菌RNA聚合酶在启动子的识别下,能够将DNA的信息转录成mRNA,作为蛋白质合成的模板。 编码序列是Pet...
①将构建好的原核表达载体pET28aEGFP转化到大肠杆菌DH5α中,涂布在含有Amp的SOC培养基上筛选阳性克隆。 ②通过蓝白筛选法验证阳性克隆是否正确载入pET28aEGFP。 (3)诱导表达 ①在含有Amp和IPTG的培养基中诱导EGFP表达。 ②通过WesternBlot检测EGFP的表达情况。
内容提示: 原核表达载体 pET28a2EGFP 的构建与表达季爱加, 宁喜斌*( 上海海洋大学 食品学院, 上海 201306)摘 要 以质粒 PEGFP2N3 中增强型绿色荧光蛋白( Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP) 基因片 段为模板, 利用 PCR 技术扩增得到 EGFP 基因片 段, 并设计引 物在其 2 端引 入酶切位点 EcoRⅠ ...
原核表达载体 pET28a 2EGFP 原核表达载体 pET28a 2EGFP的构建与表达季爱加 , 宁喜斌 3 (上海海洋大学 食品学院 ,上海 201306 ) 摘 要 以质粒 PEGFP2N3中增强型绿色荧光蛋白 ( Enhanced Green F luo re scen t P ro te in, EGFP)基因片段为模板 ,利用 PCR 技术扩增得到 EGFP基因片段 ,并设计引物在其 ...
在自然光下,转化子在 LB固体培养基(舍lmmol/L的IPTG和5Og/mL的卡那霉素(Kan))中茵落呈绿色.在荧光显微镜下受蓝 光激发,可以清楚观察到发绿色荧光的转化子.成功构建的原核表达栽体pET28a.EGFP在E.coliBL21中得 到了高效表达,为以后作为荧光标记物标记食源性病原茵提供了一定的理论和技术支持. 关键词绿色荧光...
在原核表达蛋白时,挑重组菌后放入LB液体培养基中培养10h(忘记加卡那霉素),之后再取100ul转移到10ml的培养基(加了卡那霉素)中扩大培养,由于用的是原核表达载体PET28a,属于卡那抗性,这样影响大不大? 网友 1 最佳答案 回答者:网友 理论上影响是比较大的,原核LB培养不加抗生素的话,很容易出现丢失了带有外源基因...
原核表达载体pET28a-EGFP的构建与表达
电话:400-800-2947 工作QQ:1843439339 (微信同号) 邮件:Biovector@163.com 手机:18901268599 地址:北京 已注册 详细信息 咨询记录(共0条) pet28a-his plasmid vector原核表达载体质粒 Bacterial vector for expression of N-terminally 6xHis-tagged proteins with a thrombin site. For other reading frames, use...
原核表达载体pET28a-EGFP的构建与表达.pdf,微 生物学杂志 2011年7月第31卷第4期 JOURNALOFMICROBIOLOGYJuly2011Vo1.31No.4 69 原核表达载体 pET28a-EGFP的构建与表达 季爱加 ,宁喜斌 ‘ (上海海洋大学 食品学 院,上海 201306) 摘要 以质粒 PEGFP—N3中增强型绿色荧光蛋
理论上影响是比较大的，原核LB培养不加抗生素的话，很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响目的蛋白的表达量。所以如果这个蛋白表达培养的实验是第一次做的话，建议重做一遍以保证数据的准确。如果不是第一次做的话，可以对比下之前的表达数据验证...