常见的融合型原核表达载体有:pET系列(如上个视频中的pET-28a,还有pET-32a)、PGEX(如pGEX-4T和pGEX-6P-1等)系列和pMAL系列(pMAL-p2x和pMAL-c2X)等。以下面这个载体为例子,我们可以看到在多克隆位点的C端和N端各有一个6×His的标签,通过金属离子亲和层析技术(如镍柱亲和层析),可以方便地将带有6×His标签的重...
6×His标签的分子量相对较小,对目标蛋白的结构和功能影响较小,因此在后面的蛋白纯化中一般也不需要将该标签切除。这是pET系列载体普遍会带有的标签。 图二、融合型原核表达载体pET-28a 而pGEX -4T通常带有GST标签,GST标签是由谷胱甘肽S-转移酶的基因序列编码的一段多肽序列,。这段序列通常被融合到目标蛋白的N端或...
Pet28a原核表达载体的构建特点是将多个功能元件组合在一起,以实现高效的蛋白质表达。主要包括启动子、编码序列、标签序列和终止子等。 Pet28a的启动子是一段能够识别并与细菌RNA聚合酶结合的序列,用来启动基因的转录。细菌RNA聚合酶在启动子的识别下,能够将DNA的信息转录成mRNA,作为蛋白质合成的模板。 编码序列是Pet...
③通过DNA连接酶将EGFP基因插入到pET28a质粒中,构建原核表达载体pET28aEGFP。 (2)转化与筛选 ①将构建好的原核表达载体pET28aEGFP转化到大肠杆菌DH5α中,涂布在含有Amp的SOC培养基上筛选阳性克隆。 ②通过蓝白筛选法验证阳性克隆是否正确载入pET28aEGFP。
原核表达载体pET28a-EGFP的构建与表达 季爱加,宁喜斌‟ (上海海洋大学食品学院,上海201306) 摘要以质粒PEGFP—N3中增强型绿色荧光蛋白 (EnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)基因片段为模 板,利用PCR技术扩增得到EGFP基因片段,并设计引物在其2端引 入酶切位点EcoRI和饿Ⅲ,对引入酶 ...
毕业论文《绿色荧光蛋白的基因克隆及表达研究》 TATEGFP融合蛋白的表达、纯化及穿膜活性研究 融合蛋白TAT-EGFP的表达及其对膀胱癌细胞和组织的穿膜活性鉴定 原核表达载体pET28a_EGFP的构建与表达 格式:PDF 页数:5 上传日期:2012-12-25 11:27:43 浏览次数:542 下载积分:500 加入阅读清单 93...
理论上影响是比较大的，原核LB培养不加抗生素的话，很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌...
常用原核表达载体如pET15b，pET28a，pGEX4T1，pGEX-6p-1等。如图所示，pET15b常用的酶切位点如：Nde I、Xho l、BamH I。双酶切位点的选择原则：1）酶切位点存在于载体上，不存在于基因序列中；2）两个酶有共同的缓冲体系；3）两个酶在载体上酶切位点位置不能太近。3、Primer 5预测目的序列酶切位点 1...
⑤具备适用于外源基因插人的酶切位点。综上，原核蛋白表达载体质粒包括复制子(Replicon)、启动子(promoter)、筛选标签(selection marker)、终止子和核糖体结合位点多克隆位点（MCS）和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy)，常见的原核表达载体pET-28a（+）、pGEX-4T-1、pET SUMO。
常用原核表达载体如pET15b,pET28a,pGEX4T1,pGEX-6p-1等。如图所示,pET15b常用的酶切位点如:Nde I、Xho l、BamH I。 双酶切位点的选择原则: 1)酶切位点存在于载体上,不存在于基因序列中; 2)两个酶有共同的缓冲体系; 3)两个酶在载体上酶切位点位置不能太近。