原核表达蛋白纯化步骤 1. 取原核细胞 2. 破碎细胞 3. PCR识别 4. 提取mRNA 5. 逆转录获取cDNA 6. 构建重组质粒 7. 筛选质粒 8. 质粒转化 9. 表达蛋白 10. 细胞裂解 11. 离心分离 12. 采集上清液 13. 盐析过程 14. 进行层析纯化 15. 分子筛选过程 16. 进行凝胶电泳 17. 酶切确认 18. 鉴定纯化...
原核表达-蛋白纯化-EMSA(凝胶阻滞)详细步骤 下载积分:900 内容提示: EMSA 实验方案 1. 原核生物中进行外源蛋白诱导, 外源蛋白提取、 纯化和浓缩所用试剂: 1.1. LB 液体培养基(低盐): 蛋白胨 10g, 酵母粉 5g, NaCl 5g, 用 D.D.W 溶解后, 调 pH 值至 7.3, 定容至 1000ml, 室温保存。 1.2. 1mol...
7.超声后的蛋白溶液于8,000×g,4°C离心30min。 15,000×g,4°C离心15min可省略步骤10。 8.在步骤7离心的同时。取下20 ml新层析柱(Qiagen, #34964)的帽子并剪掉底部尖端再盖上帽子,加入混匀的50% NI-NTAbeads (Qiagen, #S13-26-36-46; GST beads, GE, #17-0756-01)悬液2 ml。 9.取下层析...
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原核表达-蛋白纯化-EMSA(凝胶阻滞)详细步骤
核表达可溶性蛋白纯化步骤beads帽子 大规模可溶性蛋白纯化实验操作HaoLabinSII1.取20µLE.coliBL21目的菌种加入装有10mlLB培养基的50ml离心管中,加入氨苄青霉素(Biobasicinc,#AB0028)至终浓度为100µg/ml或硫酸卡那霉素(生工,#0408)至终浓度为50µg/ml,37°C,250rpm,摇菌过夜。2.取过夜培养的菌液8ml加入...