在这种方法应用中:1),增加了每条链的测序通过次数(DNA的中位大小为1.7kb,测序中位数是32);2)在文库准备过程中,通过ssDNA断口链接或者使用NanoSeq A-tailing方法进行末端加尾,或者使用无需加尾的方法,以去除实验过程中的非特异性信号;3)改进了...
单链DNA测序的原理基于文献中著名的Sanger测序方法。Sanger测序是由Frederick Sanger在上世纪70年代发明的。它是一种基于DNA聚合酶链延伸反应(PCR)的方法,使用到了DNA复制和逐渐终止的特点。 在单链DNA测序中,首先需要提取待测DNA分子。提取可以通过标准的DNA提取方法,如酚/氯仿提取,离心等实现。提取后,需要将DNA分子...
DNA测序时,先将待测单链DNA模板、引物、有关酶、4种脱氧核苷三磷酸(dNTP,N代表A、T、C、G)均加入4个试管中,再分别加入ddGTP、ddATP、ddCTP、ddTTP。ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点,并终止DNA片段的延伸,从而形成不同长度的DNA片段。分离4支试管中所有DNA片段,分泳道进行电泳(其分离原理仅依据分子量大小),...
PCR的三个步骤分别是1.高温变性:利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，；2.低温退火:低温（经...
研究人员利用HiDEF-seq对血液样本进行了检测，发现血液DNA中ssDNA上C>T突变的检出率为每个碱基2.0×10^-8。此外，还检测了线粒体DNA中双链突变率高的原因。总之，本研究建立了一种新的测序方法HiDEF-seq，实现了对基因组中单链DNA突变的检测，并对这些单链DNA突变最终引起永久性双链DNA突变的情况...
1、Nature Methods：何川团队开发出新型单链DNA测序方法KAS-seq 美国芝加哥大学何川课题组在《自然—方法学》杂志上发表了题为“Kethoxal-assisted single-stranded DNA sequencing captures global transcription dynamics and enhancer activity in situ”的研究结果，开发出一种乙氧二羟丁酮辅助的单链DNA测序技术，可...
近日,芝加哥大学何川研究团队开发了一种新的单链DNA测序(KAS-seq)方法。KAS-seq可在全基因组范围内快速、敏感地检测和定位由转录或其他过程产生的ssDNA,且只需使用1000个细胞即可实现。4月6日,该研究成果在Nature Methods上发表,文章题为“Kethoxal-assisted single-stranded DNA sequencing captures global transcriptio...
诺赛基因测序实验室找到了一种有效用于siRNA模板测序的技术,可提供令客户满意的测序结果。 3、GC-rich模板测序: 一般,在不少于100～150个碱基序列中,GC含量高于60%或65%,序列可以称作是GC-rich样品。GC-rich样品,因变性后的DNA单链可形成复杂的二级结构,标准测序流程常常得不到满意的测序结果。公司测序实验室找到...
EZ DNA Methylation-Lightning Kit 进行亚硫酸氢盐转化;之后,借助基于单链的 SRSLY NanoPlus DNA NGS Library Preparation Base kit 将样本变性为单链 DNA,并进行接头连接和索引 PCR;最后,分别采用 Twist Exome 2.0 Panel 和 Twist Human Methylome Panel 进行目标富集,并在 Illumina NovaSeq6000 平台上进行测序。在...
MDNA单链DNA噬菌体可用作DNA测序载体Mstrand