单克隆抗体制作之前应该进行致敏b淋巴细胞的制备,通常需要选择使用小鼠,然后再对小鼠进行注射免疫,其原理主要是在体内抗原的刺激下产生能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白,来达到抗体的效果,然后还需要取出致敏B淋巴细胞,能够将致敏的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合,能够生成杂交瘤的细胞。 单克隆抗体制备的主要步骤-按需...
每孔加TMB单组份显色液100 μl,室温避光15 min。 8.7读值,每孔加终止液50 μl,酶标仪OD450nm立即读数,根据OD450nm值判定抗体亚类。 9、小鼠腹水的制备与纯化(抗体纯化) 将弗式不完全佐剂注射到12周龄BALB/c小鼠腹腔内,每只300 μl,7天后腹腔接种单克隆细胞,接种7天后采集腹水...
鼠源性抗体 杂交瘤单克隆抗体制备技术的基本原理是利用聚乙二醇作为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有不断繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞在体外进行融合，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养(克隆化)，最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能不断繁殖的...
该流程是最常用最简单的一种鼠源单克隆抗体制备方法。其他动物的抗体制备可以使用该protocol,但是不一定是最简单的。比如,兔单抗的制备可以直接用Phage display或者直接给B细胞做scRNA-seq获取抗体的cDNA。 本流程主要分为三个阶段,即:小鼠免疫原接种;杂交瘤细胞制备;阳性单克隆细胞筛选和扩增; (一)免疫原接种 (1...
简述单克隆抗体的制备。相关知识点: 试题来源: 解析 答:(1)・对动物注射特定的抗原蛋口,使其产生免疫反应;提取合成专 一性抗体的单个B淋巴细胞,但这种B淋巴细胞不能在体外生长。 (2) ・应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,得到杂交瘤细 胞。这种细胞既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性,也有骨髓瘤...
单克隆抗体制备方法: (1)太外培养法:体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞,从上清液中获取单克隆抗体.一般包括悬浮培养法和固相培养法。 (2)动物体内诱生法,动物体内诱生法是一种操作简便、经济的常用方法,主要用于生产科研或诊断用的单克隆抗体,是一般用途的单克隆抗体制备的首选方法.常用的体内诱生法有实体瘤法...
单克隆抗体是通过杂交瘤技术制备的。具体来说,首先从免疫动物(例如小鼠)中收集抗体形成的B细胞,然后将这些细胞与肿瘤细胞融合,得到一种被称为杂交瘤的细胞。这些杂交瘤能够持续产生特定的抗体,因为它们保留了B细胞的抗体合成能力和肿瘤细胞的无限增殖能力。 接下来,从杂交瘤中筛选出能够特异性结合到目标分子的单个克隆...
单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。 (1)体内诱生法:取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周,可见小鼠腹部膨大,用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体。
答:(1)、抗原制备:要制备特定抗原的单克隆抗体,首先要制备用于免疫的适当抗原,再用抗原进行动物免疫。 (2)、免疫动物:一般采用与骨髓瘤供体同一品系的动物进行免疫。免疫方法通常采用体内免疫法和体外免疫法。 (3)、脾细胞和骨髓瘤细胞的融合:取适量脾细胞与骨髓瘤细胞进行混合,在PEG作用下诱导它们融合,时间控制在...