从超低温冰柜中取出DH5a菌种和BL21(DE3)菌种,放置在冰上。在超净工作台中用烧红的接种环插入冻结的菌中,然后接入含2mL LB培养基的试管中,37℃摇床培养过夜。 取0.5mL上述菌液转接到含有50 mL LB培养基的三角烧瓶中,37℃下25 r/min摇床培养2~3h,测定OD590为0.375(<0.4~0.6,细胞数<108/mL,此为关键参数!)...
大肠杆菌感受态细胞制备与质粒DNA的转化(实验步骤) 分组:每组同学分成2个小组,每个小组2-3位同学。 1.感受态细胞的制备 (1)从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期(老师做)。 (2)将该菌悬液以1:50的比例重新接种于5ml LB液体...
(5)葡萄糖:2g 三、制备步骤 1. 在转化实验的两天前,于YPDA培养基的平皿上活化酵母菌株。 2. 转化前一天,挑取活化的酵母细胞(单克隆)于YPDA液体培养基中,30℃,200 rpm培养过夜。 3. 将培养过夜的酵母细胞液按1:3的比例转接与新的YPDA液体培养基中,于30℃摇床内,200 rpm培养4 h。 4. 3 000 g 离心 ...
在进行感受态制备的过程中需要注意以下几点: 由于具有化学活性的细胞失去细胞膜屏障,比较脆弱,所以在对大肠杆菌进行处理时需要轻柔对待。 由于培养物中不含抗生素,所以无菌操作很重要,尤其在进行细胞的OD 600检查时。 在为整个实验室组制备感受态细胞时,需要进行分装登记并做好标识,置于-80以下环境中保存。 苏州阿尔法生...
细胞制备感受化学实验生物cacl . 1、通过本实验了解和掌握氯化钙法制备大肠杆菌感 受态细胞的原理和方法。 . 1、感受态细胞制备:所谓感受态是指受体细胞处 于容易吸收外源DNA的一种生理状态,可以通过物理 与化学方法诱导形成,也可以自然形成,在基因工 程技术中通常采用诱导的方法。用于转化的受体菌 细胞一般是限制-...
化学方法感受态细胞制备1化学方法感受态细胞制备 第一天:药品及材料灭菌准备 一、化学试剂 1M KAc 50ml 5M KOH 50ml 2M MgCl2 50ml 1M MgCl2 50ml 2M MnCl2 50ml 二、CCMD 80配方 1M KAc 500ul CaCl2.2H2O 0.6g 纯甘油7.5ml Ddw up to 50ml 5M KOH调节pH 6.0~6.4 三、SOB+Mg培养基 TryPtone 2g Yeast ...
一、化学转化感受态制备原理 化学转化感受态制备是利用化学物质(如CaCl2)处理细胞,使其处于一种能高效吸收外源DNA的状态。在这个过程中,细胞膜会发生改变,使得DNA能够更容易地通过细胞膜进入细胞内。 二、化学转化感受态制备步骤 1.细胞培养:选取合适的宿主细胞,进行传代培养,使细胞处于对数生长期。 2.收集细胞:将对数...
枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备实验-化学改进法 原理 用GM I和GM II溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a,用改进的方法制备感受态细胞。 材料与仪器 野生型枯草芽孢杆菌菌株BS501a Spizizen salts母液 CaCl2 氨基酸 GM II培养基 GM I培养基MgCl2 酵母粉 K2HPO4·3H2O 水解酪蛋白 葡萄糖 柠檬酸钠 蒸馏水 KH2PO...
一:酵母化学感受态细胞的制备 说明:按本方法制备1管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10 mL,用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10 mL,则制备液的使用量需要按比例增加。 1.挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落(4℃放置不超过3周的也可以),接种到装在50mL 离心管中...
化学法：使用低渗溶液处理细胞悬液（0.1M CaCl2），微生物细胞膜结构会发生一些变化，使得细胞在热激时...