对高分辨率的分子筛层析,样品溶液的体积主要由内水体积(Vi)所决定,故高吸水量凝胶如Sephadex G-200,每mL总床体积可加0.3～0.5mg溶质,使用体积约为0.O2倍总体积;而低吸水量凝胶如Sephadex G–75,每mL总床体积加溶质质量为0.2mg,样品体积为0.Ol倍总体积。 (2)加样方法 如同离子交换柱层析一样,凝胶床经平衡...
凝胶层析法（即凝胶过滤法，gel filtration）是利用凝胶的分子筛作用把分子大小不同的物质分离开的一种方法，又称为分子筛层析法（molecular sieve chromatography），排阻层析法（exclusion chromatography）。凝胶本身是一种分子筛，可以把分子按不同大小进行分离，好象过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。但这种“过筛”...
1.凝胶层析法（又称分子筛层析）利用凝胶颗粒的多孔网状结构，根据蛋白质分子大小进行分离：大分子（分子量 > 凝胶排阻限）：被排阻在凝胶颗粒外，沿颗粒间隙优先流出。小分子（分子量 < 凝胶渗入限）：自由进出凝胶孔，洗脱路径延长，最后流出。2.关键参数：排阻限：分子量大于此值的分子被完全排阻。渗入限：分子...
凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛。利用这种凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离,称凝胶层析 。 凝胶层析的优点 凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小彼此相差25%的样品,只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性,可对这些物质的溶液...
1.取层析柱1支（1.5cm×20cm），垂直固定在支架上，关闭下端出口。将已经溶胀好的Sephadex G-25中的水倾倒出去，加入2倍体积的0.0175mol/L，pH6.7磷酸盐缓冲液，并搅拌成悬浮液，然后灌注入柱，打开柱的下端出口，继续加入搅匀的Sephadex G-25，使凝胶自然沉降高度到17cm左右，关闭出口。待凝胶柱形成后，在...
凝胶柱层析法提纯抗体 1 简介 凝胶柱层析法也称分子筛层析、排阻层析,是根据蛋白质分子量大小不同,将蛋白质组分由大到小依次分离出来。 2 材料与仪器 器材: 层析仪 1 套;2.5x100 cm 层析柱;滤网(滤纸);1000 ml 烧杯;5 ml 吸量管;试管。 试剂: ...
凝胶层析是一种物理分离法。葡聚糖凝胶基本上不带电荷呈多惰性,不与被分离物质发生反应,所以分离的效果较好。然而由于它是葡萄糖的聚合物,因而仍有少量活性羟基,能吸附少量蛋白质等被分离的物质。为了克服这个缺点,一般使用含有离子强度达0.08的NaCl等中性盐缓冲液作洗脱液。 操作方法 (1)取层析柱1支(1.5cm×20cm...
原理简单说就是分子量不同通过凝胶柱的速度也不同凝胶是一种具有多孔,网状结构的分子筛.利用这种凝胶分子筛对大小,形状不同的分子进行层析分离,称凝胶层析 .凝胶层析的应用范围:凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质,酶... 分析总结。 原理简单说就是分子量不同通过凝胶柱的速度也不同凝胶是一种具有多孔网状结构的分...
2.掌握利用凝胶层析法测定蛋白质分子量的实验技能。 二、实验原理 凝胶层析(gel chromatography)是20世纪60年代发展起来的一种分离分析方法。其法有许多同义词如凝胶过滤、分子排阻层析、分子筛层析、凝胶渗透层析等。 凝胶层析是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。凝胶的孔隙犹如”筛眼”,当被分离的...
答:凝胶层析法常用的凝胶有天然凝胶(如琼脂凝胶)和人工合成凝胶(如交联葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶)。 特点:①琼脂凝胶有较大的孔隙,允许较大的分子渗入,因而其工作范围远大于交联葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶,琼脂凝胶的最大弱点是它带有大量电荷(主要是磺酸基,也带有一定量的羧基),层析时常需使用较高离子强度的洗...