从农杆菌分离质粒的方法步骤 一、从在含20 mg/l Kanamycin和15 mg/l Gentamycin 6 ml的液体LB培养基中接种Agrobacterium 细胞,然后在28℃、200-220 rpm培养24 h。准备进行质粒提取。 质粒提取前,检查裂解液(Lysis Solution)是否有 一、从在含20 mg/l Kanamycin和15 mg/l Gentamycin 6 ml的液体LB培养基中接...
然后进行质粒提取。 二、新鲜配制Sol II溶液（880 l H2O, 100 l SDS 10%, 20 l 10 N NaOH），及包含 4 mg/ml溶菌酶Lysozyme 的200 l Sol I (P1)溶液。 三、对培养一昼夜的的Falcon试管在3600 rpm速度下进行离心12 min，丢弃上清。 四、用200 l 5 M NaCl重悬农杆菌细胞，利用涡旋将农...
然后进行质粒提取。 二、新鲜配制Sol II溶液(880 µl H2O, 100 µl SDS 10%, 20 µl 10 N NaOH),及包含 4 mg/ml溶菌酶Lysozyme 的200 µl Sol I (P1)溶液。 三、对培养一昼夜的的Falcon试管在3600 rpm速度下进行离心12 min,丢弃上清。 四、用200 µl 5 M NaCl重悬农杆菌细胞,利用涡旋将...
就经典的碱裂解法(方法一)和在碱裂解法的基础上改进的方法二(去除了酚,氯仿提取过程,减少了提取过程中对人的伤害,且缩短了提取时间)以及改进的方法三进行了比较,实验结果表明:改进的方法二更适宜于做PCR检测,而方法三则适合于重组质粒DNA的酶切,PCR鉴定等.关键词:农杆茵;质粒DNA提取;方法比较中图分类号:Q812...
摘要 本发明公开了一种农杆菌质粒DNA的提取方法,包括如下步骤:(1)农杆菌菌液培养;(2)菌体收集;(3)农杆菌细胞破裂;(4)质粒DNA的提取。本发明提供了一种农杆菌质粒DNA的提取方法,方法科学合理,缩短了提取的时间,提高了提取的效率,提高了质粒DNA的纯度和含量,并且安全性高,具有很好的市场推广应用价值。新闻...
农杆菌dna提取tumefagribaterium产率 CTAB法尽管能很好的去除蛋白质和小分子盐,但它和SDS法一样由于破膜过于迅速,而重楼DNA链又较大,很容易在操作过程中造成DNA链的机械降解,而方法一则没有什么破膜剂而是采用研磨、冻融和细胞溶胀的方法破膜,破膜温和,相对的机械降解较少。我们在实验中总结到方法一的关键有三步...
本文比较了前人提取致癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒的方法,改变了溶菌的条件和蛋白质除去的程序,找到一种简易,快速,重复性高的提取Ti质粒的方法.本文的方法是将一份致癌农杆菌细胞同四份碱性SDS溶菌液(pH12.6)混合,这样溶菌液的pH为10.5,然后将此碱性溶菌液(pH10.5)置37℃保温30分钟.为了有效地提取Ti...
解答 解:(1)图中D过程采用了农杆菌转化法,其原理是:农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体的DNA上.根据农杆菌的这一特点,如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上,通过农杆菌的转化作用,就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上.(2)图中A表示基因表达载体的构建过程,该过程...
(2)重组后的质粒放回到农杆菌时,需用 处理农杆菌,其目的是 ,图中将目的基因导人受体细胞所用的方法是 .(3)含有目的基因的受体细胞,需经 和 过程才能发育成植株,该过程需要在 条件下进行.(4)若利用植物细胞融合的方式来获取特定的受体细胞,首先需用 处理细胞,获得有活力的原生质体,然后利用 (试剂)诱导原生质...
( 3 )用农杆菌转化法改良作物时,先将抗旱基因和农杆菌的 Ti 质粒连接构建表达载体,再将重组载体转入农杆菌中,该过程 ___ (填“是”或“不是”)转化,理由是 ___ 。 ( 4 )科研人员将长势一致的转入抗旱基因的作物(实验组)和非转入抗旱基因的作物(对照组)进行 ___ 处理,如果 ___ ,则获得了抗旱作物。