内参即内部参照(Internal Control),类似于荧光定量实验的内参基因,它们在不同组织和细胞中的表达相对恒定,常用它作为检测目的蛋白表达水平变化时来做参照物。标签抗体的合成主要是将蛋白标签是利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于
比如有时胞质、胞核分开提取而不提取总蛋白时,就要选择相应部位表达的内参蛋白。如 H3在细胞核中高效稳定表达,理论上在细胞质不表达,那么对于胞质提取的蛋白,就不能选用H3作为内参蛋白,而应该选择细胞质中表达的β-actin 、GAPDH α-Tubulin等作为内参蛋白。(内参评价推荐软件geNorm、NormFinder) 注意:使用内参抗体需...
核内参抗体有Lamin A、Lamin B、TBP、YY1、Histone-H3; 膜蛋白检测内参抗体有ATP1A1; 线粒体蛋白检测内参抗体有VDAC1和COXIV。 4. 宿主 如果要进行多重免疫印迹(使用同时靶向目标蛋白和和内参抗体的一抗探针),则所选内参抗体的宿主应不同于靶向目标蛋白的一抗宿主。 特殊实验条件 需要特别注意的是内参的选择还...
比如常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、TBP、YY1、Histone H3。而对于膜蛋白检测,常用的内参抗体为ATP1A1。对于线粒体蛋白的检测,常用VDAC1和COX IV作为内参抗体。 以上原则仅针对通常情况,需要特别注意的是内参的选择还须考虑实际实验环境状况,比如某些细胞或组织由于缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达量增高,...
一、通用内参抗体定义及应用 内参蛋白即内部参照蛋白，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。所有WB实验都需要内参，用以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。此外使用内参可以作为...
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如目的蛋白分子量为45KD,此时不适宜选择β-actin作为内参,可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。 3.目的蛋白表达部位 就一般的蛋白检测来说,β-actin、β-Tubulin抗体等就可以了,而针对于核蛋白的定量,特别是样...
1.标记内参:酶标的内参抗体可避免二抗结合总蛋白中某些免疫球蛋白产生的杂带,使用时只需在二抗孵育时加入酶标内参抗体,按照正常操作即可。 2.普通内参:当靶蛋白分子量与所选内参分子量相差不大时,可先对靶蛋白进行显色检测, 然后用Strip缓冲液洗掉膜上抗体, 重新对内参蛋白进行显色检测。当靶蛋白分子量与所选内参...
WB内参抗体对解读蛋白印迹结果至关重要,义翘神州提供一系列高质量的内参抗体,用于检测全细胞蛋白、细胞质蛋白。抗体经过多种天然细胞和组织验证,并在各种应用中充分验证,以确保您获得可重复的结果。
内参抗体，又称为对照抗体，是针对于内参蛋白进行检测的一类抗体，用于在实验中提供参照。内参蛋白通常是指在不同样本中表达水平相对恒定的蛋白质，例如GAPDH，β-actin，α-tubulin等等，帮助校正样品之间的差异，用于标准化实验条件并确保实验结果的可比性。标签抗体，通常是指针对于重组蛋白上连接的标签蛋白进行检测的...