通过碱裂法提取质粒,并使用0.8%琼脂糖凝胶电泳进行筛选。当质粒被PacI限制性内切酶切开时,显示出一个大片段(约30kb)和一个小片段(约3.0或4.5kb)时进行阳性克隆的初步确认。 质粒转染试剂 9.取1-5µl阳性质粒转化DH5α大肠杆菌细胞,进行扩增和质粒纯化。 以上就是使用pshuttle-CMV质粒进行目的基因克隆以及共转化...
其中共转化法操作简便因而得到了广 泛的应用.本文综述了共转化法研究的最新进展并对其实际应用的 可行性进行探讨. 关键词 共转化,筛选标记基因,转基因植物 StudiesofCo.transformationfortheEliminationofSelectiveMarker GenesfromTransgenicPlants LiGuiminSongKaiLiuLixiaXuShoumin ...
一种快速质粒共转化法 下载积分: 300 内容提示: 郭培懿 陈向东 谢志雄 沈萍 摘要: 将受体菌与质粒 DNA 混匀直接在 Ca2+离子选择平板上进行转化和筛选,其转化过程仅需 2 min 左右,并能得到 105 以上的转化效率 , 可满足一般克隆工作的需要。 关键词: 转化;大肠杆菌 ;Ca2+选择平板 中图分类号: Q933 , Q...
用基因枪转化法把所有的载体一同转入植物组织或细胞中,对组织或细胞进行筛选,筛选 后的植物组织或细胞再生,从而获得转基因植株。 具体采用以下步骤 1.利用植物组织或细胞作为靶组织或细胞,轰击前,将植物组织或细胞接入高渗 3培养基的培养皿中部,渗透处理,即可进行轰击; 2.利用基因枪对植物组织或细胞进行轰击; 3.材...
平板转化法:挑取受体菌单菌落接种于5mlLB培养液,37℃培养过夜,以1/100量接种于LB培养基活化2～3h(OD6000.5～0.55),取菌液1ml,12000r/min离心20～30s收集菌体,重悬于200ΜlLB培养液,加入10Μl质粒DNA(1ng/Μl),混匀,取20Μl转化混合物涂布于4℃下预冷的含Ca2+和相关抗生素的选择平板,37℃倒置培养约20h...
摘要: 共转化法是实现多基因在同一受体植株中转化的非常有效的方法.它在植物多基因代谢途径和获得去选 择标记转基因植株研究中具有巨大的应用前景, 现今已经形成以基因枪和农杆菌介导两大方法为主体的共转化系统.全 面介绍了这两种方法在共转化研究中的应用进展, 同时分析了转化过程中存在的问题和影响转化效率的因素...
农杆菌介导的共转化法培育无选择标记转基因水稻的研究进展
本发明属于有机合成领域,涉及一种共转化碘化合成三氟碘甲烷的方法。通过将羧酸、三氟甲烷和碘单质在催化剂、氧气或氧气与惰性气体的混合气体中反应得到;其中,所述催化剂为负载在载体上的AB型双功能催化剂,该催化剂不仅能催化脱羧碘代反应,还能催化脱氢碘代反应。本发明以碘原子计的单程转化率达到80%以上,通过改变...
利用高效CaCl2转化法实现质粒的共转化
摘要 一种基因枪多载体共转化方法,涉及一种植物转基因方法,由以下步骤完成,1、利用植物组织或细胞作为靶组织或细胞;2、利用基因枪对植物组织或细胞进行轰击;3、材料轰击后,继续渗透,然后转至原培养基上黑暗培养;4、继代一次后,接入合适选择压力的培养基上进行筛选,再生后获得转基因植株;5、对获得的初步筛选的转基...