实验步骤 一、细胞的甲醛交联与超声破碎(第一天) 1. 取出1平皿细胞(10 cm平皿),加入243 ul 37%甲醛,使得甲醛的终浓度为1%(培养基共有9 ml)。 2. 37℃孵育10 min。 3. 终止交联:加甘氨酸至终浓度为0.125 M。450 ul 2.5 M甘氨酸于平皿中。混匀后,在室温下放置5 min即可。 4. 吸尽培养基,用冰冷...
1、染色质制备: a、细胞/组织样本预处理;b、交联固定;c、酶消化与超声处理; 2、免疫沉淀: a、合适的抗体浓度;b、固相介质的选择;c、对照抗体的设置; 3、解交联和DNA纯化: a、蛋白酶K解交联;b、试剂盒DNA纯化; 4、下游分析: a、二代测序;b、QPCR检测;c、PCR检测。 (其步骤难点详见视频教程) 那么,如何...
12.实验步骤(1)制作染色单体:用颜色的橡皮泥制作4条染色单体。(2)制作同源染色体:用颜色大小、形态的橡皮泥表示,共1对。(3)绘制纺锤体:模拟减数第一次分裂绘制个纺锤体,模拟减数第二次分裂绘制个纺锤体。减数第二次分裂的纺锤体要与减数第一次分裂的纺锤体(4)绘制减数分裂产生的细胞:在每一条染色体的外围画一...
首先，将细胞与甲醛反应以交联，37℃孵育10分钟后终止交联，随后用甘氨酸终止反应并清洗细胞。接着收集细胞并加入含有蛋白酶抑制剂的SDS裂解液，超声破碎细胞。二、除杂及抗体哺育（第一天）超声破碎后，通过离心去除不溶物质，留取部分样本用于实验，其余样本保存。在实验样本中加入抗体或对照，按照特定步骤...
染色质免疫共沉淀Chip实验具体方法及步骤在保持组蛋白和DA联合的同时,通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物 抗体,染色质被切成很小的片断,并沉淀下来。IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的prorein A特 异性地结合
(1)为您的实验查找适合的抗体 (2)优化染色质剪切 (3)评估您的 ChIP 实验能否成功 五个步骤获得理想 ChIP 结果 Step1:交联和裂解——稳定复合物并分离核组分 第一步对时间要求严格并且需要优化。体内共价交联稳定蛋白质-DNA相互作用并于特定时间点进行分析。通常采用甲醛交联,加入甘氨酸以终止反应。交联剂渗透到完...
第3 步: 染色质制备(剪切/消化) 提取步骤产生所有核材料,包括未结合核蛋白、全长染色质和交联蛋白-DNA 复合物。为了分析蛋白质结合序列,提取的基因组 DNA 必须被剪切成更小的可行片段。DNA 裂解通常是通过机械的超声波或微球菌核酸酶(MNase)消化来实现...
交联染色质免疫共沉淀实验步骤一 交联和细胞收获：甲醛可以使蛋白质与DNA交联。交联结果的质量取决于对交联时间的把握，样品的交联时间通常为2-30分钟，过度的交联会降低抗原结合和超声破碎效率。抗原决定簇也将被掩盖，添加甘氨酸可以消除甲醛并终止交联反应。①准备两个充满细胞的150cm2细胞培养皿（1 * 107-5 * ...
将上清移入新的管子中，开始准备进行染色质免疫共沉淀（IP）。③每个超声样品取50ul，此时样品标记为INPUT，用于定量DNA浓度和PCR空白对照。超声后的染色质应立即在液氮中冷冻或在-70°C下保存2个月，避免反复冻融。检测DNA浓度：①INPUT样品用于计算后续IP样品的DNA浓度，DNA可以通过PCR纯化试剂框（添加70ul洗脱液，...
ChIP实验包括以下几个关键步骤: 1.交联,第一步是对活体细胞或组织中的蛋白质与DNA进行交联,以保留它们之间的相互作用。通常使用甲醛等交联剂处理细胞。交联反应通过加入甘氨酸来停止,甘氨酸可以中和甲醛。 2.细胞裂解和染色质断裂,然后将交联的细胞裂解,释放染色质。染色质可以通过声波处理或酶消化来断裂成较小的片段...