封闭缓冲液:(1X PBS/5% 正常血清/0.3% X-100):准备 10 ml 缓冲液,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清并混匀。搅拌时加入 30 l Triton X-100。 抗体稀释缓冲液:(1X PBS/1% BSA/0.3% Triton X-100):准备 10 ml 溶液,添加 30 l X-100 到 10 ml 1X PBS 中。混匀后再加入 0.1g BSA,...
细胞免疫荧光tritonx-100用什么稀释?网友 1 最佳答案 回答者:网友 PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释,再加一点Trit轮财onX100效果好。 培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了,用培据一减燃军十告罗息接持养液没什么意义,只要保证其pH等条件适合就好了。 抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下,...
二、细胞通透 每个孔中加入300μL0.2%的Triton X-100(Triton X-100使细胞更加通透,需要用PBS稀释),将24孔板放入4℃ 的温度中孵育10min(Triton X-100 4℃孵育通透效果更佳) 从冰箱中取出孵育好的细胞,用移液枪弃去24孔板中的Triton X-100 (收集处理废液),每个孔加入500μLPBS(PBS没过底部) 浸泡5min后弃...
对于多聚甲醛固定的制剂,用 0.2% Triton X-100 处理 5 分钟,或者用 -20°C 甲醇处理 5 分钟。 甲醇透化步骤:甲醛固定后,用冰冷的100%甲醇覆盖细胞(用量足以将细胞完全覆盖至3-5mm深度,不要让细胞干燥),将细胞在甲醇中冷冻10分钟。 在PBS 中冲洗 5 分钟。 阻塞步骤 注意:所有孵育均应在 RT 下进行,除非...
Triton 0.3% Procedure: 1.用PBS轻洗细胞两次,时间要短,对于易漂的细胞尤其要轻缓(Fisher plus可直接用于一般细胞培养,对神经元培养,玻片可用PLL预铺过夜) 2.加入4%PFA固定20min(此步可暂停,换成PBS,4度可放置1周) 3.0.3% TritonX-100/PBS 破膜20min; ...
2.透膜处理:在含0.1% Triton X-100的PBS中进行10min的透膜处理,再用PBS洗2次,每次5-10分钟。 3.封闭:用4%羊血清封闭液,室温封闭30分钟。 4.孵育一抗:吸尽液体,勿洗,添加一抗,于37℃条件下孵育1h或放在4℃冰箱过夜,再用PBS洗3次,每次5-10分钟。 5.孵育二抗:滴加荧光素标记的二抗,避光,37℃,60mi...
方法/步骤 1 首先油笔画圈，再利用4%PFA溶液固定切片20min，注意4%PFA要用PBS配制，否则容易引起细胞肿胀，免疫荧光最好的效果不好，固定完，1*PBS洗3次。2 0.4%tritonx-100，通透10min，室温，然后1*PBS洗3次。3 3%BSA对每个标本封闭1h，室温。4 封闭过后，不必洗，而是要把多余的BSA吸走，...
首先，进行细胞固定和透化过程：将含有细胞的盖玻片放入1 × PBS中，连续冲洗3次，每次3分钟。 接着，用4%的多聚甲醛固定盖玻片15分钟，再用1 × PBS清洗3次，每次3分钟。如果细胞膜上没有表达抗原，此步骤可省略。 使用0.5% Triton X-100（用1× PBS稀释）在室温下对细胞膜进行15分钟的通透...
对于检测细胞核抗原,我们需要使用0.5% Triton X-100(PBS配制)在室温下通透10分钟,然后再次使用1×PBS洗涤细胞片3次,每次5分钟。如果是检测细胞膜抗原,则可以直接跳过此步骤。接着,使用1% BSA进行室温封闭30分钟,以封闭非特异性抗原表位。按照抗体说明书操作,使用一抗在4°C湿盒中静置过夜。次日取出细胞片,室温下...
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。 培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。 抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。