在免疫沉淀后,将目标蛋白质及其相互作用蛋白从Beads上洗脱下来,随后通过还原、烷基化和酶解(通常使用胰蛋白酶)等步骤将蛋白质消化成肽段,以便后续质谱分析。 质谱分析(Mass Spectrometry, MS) 质谱分析是IP-MS的核心步骤,用于鉴定和定量免疫沉淀获得的蛋白质复合物。具体过程如下: 1.液相色谱分离(LC):将肽段混合物...
5.预清洗裂解物:向 1 mL 裂解物中加入 50 μL 来自相同物种和同亚型的非目标抗体作为免疫沉淀抗体,在冰上孵育 1 h。 6.4 °C, 5000 g 离心 10 min 弃去微珠沉淀物,保存上清液进行免疫沉淀。 7.抗体孵育:向微量离心管中加入约 70～100 µL 的蛋白质 A 或 G,加...
免疫沉淀-质谱技术作为解析生物药物互作的精准工具，为研究人员提供了一种强大的手段来探索蛋白质相互作用、识别靶标以及发现新的生物标志物。随着技术的不断进步和创新，免疫沉淀-质谱技术在生物药物研究中的应用前景将更加广阔。
1. 免疫共沉淀-质谱技术的原理 免疫共沉淀-质谱技术是一种将免疫沉淀与质谱分析相结合的方法。其基本原理是利用特异性抗体对目标蛋白进行识别并与其结合，然后通过沉淀抗体-蛋白复合物来富集目标蛋白及其相互作用的蛋白分子。接下来，通过质谱分析技术，可以鉴定和定量免疫共沉淀样品中的蛋白质，进而揭示蛋白质相互作用网...
免疫共沉淀质谱(Immunoprecipitation Mass Spectrometry, IP-MS)是一种用于鉴定蛋白质相互作用的实验手段,它结合了免疫沉淀和质谱分析技术。 一、样品准备 首先,从细胞或组织中提取蛋白质。这通常涉及到使用蛋白质裂解缓冲液(比如 RIPA 缓冲液)破裂细胞,并通过离心来分离蛋白质。
免疫沉淀和质谱分析结果 免疫沉淀和质谱分析即免疫沉淀与质谱联合分析（Immunoprecipitation and Mass Spectrometry，IP-MS），其将免疫沉淀获得的靶蛋白进行后续质谱分析，对靶蛋白进行定性研究，以确认目标蛋白与预期靶标的特异性相互作用。IP-MS分析首先根据目标蛋白选择候选细胞系模型来表达感兴趣的靶蛋白，然后提取细胞...
蛋白质免疫沉淀-质谱(Immunoprecipitation-Mass Spectrometry,IP-MS)是一种强大的工具,用于研究蛋白质间的相互作用。为了获得可靠和可重复的结果,样品的质量和处理是至关重要的,以下内容从“样品纯度、样品完整性、样品量、样品缓冲液、抗体选择”方面描述了蛋白质IP-MS对样品的要求。
1.说明为何将免疫沉淀和质谱联用：通过将免疫沉淀与质谱分析相结合，可以在蛋白质水平上鉴定和定量目标蛋白质及其相互作用伙伴。2.强调IP-MS技术的优势：高灵敏度、高特异性、全面性和定量能力等，以及其相对于传统方法的优势。四、IP-MS技术在生物药物研究中的应用：1.描述IP-MS在药物研发中的作用：通过揭示药物...
一、免疫沉淀的基本原理: 1.解释免疫沉淀的概念和原理:免疫沉淀是一种利用特异性抗体与目标蛋白质结合的方法,将目标蛋白质从复杂的生物样品中富集出来。 2.介绍免疫沉淀的步骤:包括抗体的选择和结合、复合物的沉淀和洗涤等过程。 二、质谱分析的基本原理: 1.解释质谱分析的概念和原理:质谱分析是一种基于离子...
免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析是将特异性抗体用于选择性地捕获目标蛋白质及其相互作用的蛋白质，随后利用质谱技术对这些蛋白质进行鉴定和定量分析的方法。在IP步骤中，我们使用抗体与目标蛋白质结合，从复杂的细胞提取物中高效地将目标蛋白质及其相互作用的蛋白质捕获下来。然后，将这些蛋白质通过质谱技术进行分析，识别其...