1商业化T载体: 一般来说,商业化的T载体多是先使用平端限制性内切酶(如EcoRV)将克隆载体进行线性化,然后再单独加入dTTP和Taq酶72〜751反应,进行末端的加T。 2自制T载体: 一种常见的自制方法是利用限制性内切酶制造出具有单个T末端突出的片段,最常用的内切酶为Xcml,其识别和切割特点如下:其中XcmI的识别序列分别为...
3‘ —基因特异性反向扩增序列 + 酶切位点(可选)+ 下游载体末端反向同源序列—5’ 载体与插入片段、插入片段与片段连接处引物、载体反向扩增引物设计 制作最终序列图谱 引物设计工具 1.在线设计 2.SnapGene软件更加专业,这款软件用来绘制图谱,编辑序列,设计引物,...
其次,连接酶是一种能够将两个DNA片段连接在一起形成连续链的酶。 3.2 克隆载体的作用与构建原理 克隆载体在基因工程中起着至关重要的作用。它们提供了一个容纳外源DNA片段并在细胞中复制和表达该片段的平台。常见的克隆载体包括质粒、噬菌体、人工染色体等。 克隆载体通常通过以下步骤进行构建: 1. 选择合适的克隆...
无缝克隆是一种新型基因克隆技术,它可以同时将1到多个片段高效的插入到任何载体。目前应用较广泛的无缝克隆方法是Gibson Assembly和In-Fusion Cloning。这两种方法的在原理上非常相似:都是通过外切酶产生黏性末端、然后利用体内或体外重组酶进行连接,...
(1)BG2的克隆可利用PCR技术,需要一小段能与该基因碱基序列互补配对的___作为引物,BG2在克隆前,需准备___种引物。(2)上图为利用PATC940(经农杆菌Ti质粒改造获得)构建BG2抗病质粒的过程。图中右下处的酶为DNA连接酶,人工设计的复合启动子的作用是驱动转录和提高(增强)转录活性,它位于目的基因(BG2)的___(填...
分子克隆,又称为基因克隆,是指将一个或多个特定的DNA片段分离出来,经过一系列的克隆操作后,在细菌、酵母或其他宿主细胞中大量复制,进而产生基因克隆体的技术。这个技术主要基于分子生物学的基本原理,涉及到DNA的提取、限制性酶切、连接、转化等多个步骤。二、分子克隆的重要性分子克隆技术是现代生物学研究的重要工具...
该过程使用的限制酶是HindⅢ.(3)过程④采用PCR技术进行扩增,其原理是DNA双链复制;PCR操作是在较高温度下进行的,因此需要用到的工具酶是Taq酶等热稳定聚合酶.(4)PCR技术的前提条件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物.因此,过程⑤中克隆的启动子与外源基因连接时,根据外源基因的核苷酸序列设计引物a...
基因工程的设计和操作中,启动子是运载体的重要组成部分。下图是一种克隆启动子的办法,请据图分析回答: (1)启动子是___识别和结合的部位。若要获得启动子的碱基序列不能依据基因表达产物推知,原因是___。 (2)过程①、③分别使用的限制酶是___。 (3)过程④的原理是___,需要用到的工具酶是___。 (4)过...