质粒是小型环状DNA分子,在基因工程中作为最常用,最简单的载体,必须包括三部分:遗传标记基因,复制区,目的基因。 克隆载体是能够通过限制性内切酶,将目的DNA片段整合进去,并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。 其性质:①具有复制起始点②具有两种以上易被检测的选择性标记③在选择标记上具有多种限制酶的单一切点④具有...
较小的相对分子质量的质粒易于操作,便 于导入细胞和进行繁殖,克隆了外源 DNA片段之后仍可有效地转化给宿主细胞。较高的拷贝数 有利于质粒DNA的制备而且会使细胞中克隆基因的剂量增加。 (5) 有安全性。作为克隆载体应当只存在有限范围的宿主;在体内部进行重组;不会发生 转移;不产生有害性状;不会离开宿主而自由扩散...
一种理想的质粒克隆载体应具有两种抗菌素抗性基因,以便为寄主细胞提供易于检测的表型性状作为选择记号,而且在有关的限制酶识别位点上插入外源DNA片段之后形成的重组质粒,至少仍要保留一个强选择记号。 ③具有若干限制酶单一识别位点 这样的分子结构特性,可以满足基因克隆的需要,而且在其中插入适当大小的外源DNA片段之后,应...
选择标记基因🎯:质粒载体通常带有选择标记基因,如抗药性基因,便于在转化过程中筛选出阳性克隆。 安全性🛡️:选择质粒载体时,安全性也是一个重要考虑因素,确保不会对宿主细胞或人体造成危害。 其他因素🌟:除了以上几点,还要考虑质粒载体的其他特性,如是否易于操作、是否具有特定的表达系统等。通过...
载体大小:2686 bp 多克隆位点:是 备注:编码β-半乳糖苷酶α肽(lacz’)的表达载体,允许蓝白视觉检测再结合物。 分子克隆特性: 高拷贝数:pUC19质粒具有高拷贝数,可达500-700,有利于提高目标DNA片段的产量。 多克隆位点(MCS):含有54碱基对的多克隆位点,包含13种不同的限制酶位点,便于插入外源DNA。
克隆质粒载体的基本组成有 A. 含有可利用宿主细胞复制系统复制起始的区域 B. 含有一个或多个抗性基因的表达区域 C. 含有用于外源基因的DNA限制性内切酶作用位点 D. 含有多克隆位点 E. 克隆质粒利用自身的复制酶系统,对外源基因进行扩增 相关知识点:
理想的基因克隆载体应具备: (1)在宿主细胞内可自行复制,并保持一定的拷贝数; (2)有适宜的限制性核酸内切酶切割位点,最好对同一种限制酶有单一切点; (3)载体分子应尽量小,可插入较大的外源DNA而不影响复制; (4)有一定的筛选标记,便于识别和筛选。 质粒可作为载体是由于其本身具有以下特点: (1)质粒是存在于...
凡经改建而适于作为基因克隆载体的所有质粒DNA分子,都必定包括如下三种共同的组成部分,即复制基因(replicator)、选择性记和克隆位点。 二.质粒DNA编码的表型 质粒DNA仅占细胞染色体组的1%～3%左右,但却编码着一些重要的非染色体控制的遗传性状。其中对抗菌素的抗性最质粒的最重要的编码特性之一。 三.质粒DNA的转移 (...
图一:质粒构建流程示意图 1、如何选择载体? 载体通常分为克隆载体(Cloning Vector)与表达载体(Expression Vectors)两种。 克隆载体大多是高拷贝载体,能够将外源基因与克隆载体的质粒连接,导入原核细菌内,进行大量复制克隆。主要用途是保存目的基因片段。 在选择克隆载体时应注意: ...