摘要:为实现体外大规模制备单纯疱疹病毒HSV-IgM (HSV1, HSV2)人鼠嵌合抗体,本研究通过RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends, RLM-RACE)技术获取其对应杂交瘤细胞基因序列,构建嵌合抗体至真核表达载体...
人鼠嵌合抗体基本原理是从分泌某种鼠单抗的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠VL(轻链可变区)和VH(重链可变区),经过基因重组分别与人的CL(轻链恒定区)和CH(重链恒定区)区基因按照一定的方式相拼接,克隆到表达载体中构建鼠/人轻重链基因表达载体,并转入适当的宿主细胞表达来制备特异性嵌合抗体(图2)。
人-鼠嵌合抗体,即抗体的可变区来自鼠单克隆抗体,而恒定区则来自人的抗体。它是通过从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因,与人Ig恒定区基因连接,插入适当表达载体,转染宿主细胞表达产生。嵌合抗体既保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力,又大大减少了鼠源性在人体内的免疫原性,其半衰期明显延长,且在介导CDC及ADCC方面...
【题目】为获得更好的疗效,科学家运用基因工程技术对抗体进行改造,制备人鼠嵌合抗体,如图1所示。嵌合抗体具体制备过程如图2所示。据图表回答下列问题:表1引物对序列表P1 A
人鼠嵌合抗体的制备方法主要有三种:合成法、骨髓细胞法和转基因技术。合成法通过基因合成和连接技术,将人源变异框架区与小鼠源亲和力区域进行连接。骨髓细胞法则是通过提取小鼠骨髓细胞,并进行融合和筛选,获得具有人鼠嵌合结构的抗体。转基因技术通过将人鼠嵌合基因导入小鼠的胚胎细胞中,使小鼠能够产生人鼠嵌合抗体。 3...
摘要:目的体外制备人鼠嵌合弓形虫免疫球蛋白M(TOX-IgM)抗体,并验证加入J链对IgM抗体蛋白聚体、效价及稳定性的影响。方法从美国国家生物信息中心数据库获取抗体的重链可变区、轻链可变区以及J链序列,通过DNA重组技术分别将TOX抗体轻重链可变区和人源恒定区进行拼接,构建人鼠嵌合IgM表达载体,转染HEK293F细胞进行表达。
基因工程人鼠嵌合抗体制备 基因工程抗体的出现,极大地推动了抗体技术的发展和抗体药物及诊断试剂的研发。我们成功建立了人鼠嵌合抗体及人源全长抗体改造系统。我们的系统包括基因克隆,载体构建,表达筛选、抗体制备及亲和力测定等一整套嵌合(全长)抗体制备程序。
制备人-鼠嵌合抗体的过程是一门精细的艺术,它涉及材料、试剂、仪器以及一系列关键技术。以下是关键步骤的概述:1. 材料和试剂:从大肠杆菌DH5a和大肠杆菌感受态细胞等基础材料,到氨苄西林钠等关键试剂,每一步都需要精心准备和精确执行。2. 技术核心:可变区基因的克隆是关键。首先,通过RNA提取、反转录...
为减少鼠源单克隆抗体可能引起的副作用,某研究团队对鼠源单克隆抗体F进行改造,制备了人-鼠嵌合抗体F’,具体流程为:提取鼠源杂交瘤细胞RNA,逆转录后通过 PCR 扩增抗体F的基因序列,将其部分序列用人的相应抗体基因序列进行替换,再构建表 达载体,在体外制备人﹣鼠嵌合抗体F’。为检测抗体性质,他们测定了F’单独与抗...