亲和色谱法原理 亲和色谱法是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱法基于生物分子之间的特异性相互作用,如抗原-抗体、酶-抑制剂、激素-受体等之间的相互作用,来实现目标分子的纯化和分析。 亲和色谱法的原理是在固定相上固定亲和剂(affinity ligand),该亲和剂可以选择性地与所要分离的目标分子结合。利用目标
分子排阻色谱法基于分子大小差异,利用多孔固定相分离;离子交换色谱法基于电荷差异,通过带电固定相对离子化物质的吸附与解吸附分离;亲和色谱法基于生物分子间特异性结合作用分离目标物;疏水作用色谱法基于疏水相互作用,在高盐条件下吸附目标分子,低盐时洗脱。 1. **分子排阻色谱法(SEC)**:固定相为多孔凝胶,分子按大...
其原理是通过靶分子与固相上的配体之间产生亲和结合来实现分离。亲和色谱法利用了配体与靶分子之间的特异性相互作用,如抗原与抗体的结合、酶与底物的结合等,从而实现对目标分子的选择性捕获。其分离和纯化效果优于传统的分离方法,成为现代生物科学研究中不可或缺的技术手段。 二、亲和色谱法的应用 亲和色谱法在生物学...
三嗪活性染料的结构与生物酶的天然底物接近,可与酶活蛋白质的活性位点结合应用于亲和色谱。Cu2+、Zn2、Ni2+、Fe2+、Fe3+等金属离子通过具有整合作用的有机官能团固定在基质或间隔臂上,利用螯合物中的金属离子与生物分子间的特异性亲和作用实现生物分子的分离或纯化。常用的螯合剂包括亚氨基二乙酸、亚氨基二乙醛、...
传统的观念认为亲和色谱是基于配基-配体亲和反应的原理,利用色谱的差速迁移理论,实现对目标分子的分离,仅仅是一种组分分离的选择性过滤法。然而,这一理论是建立在配基-配体亲和作用是均相反应和宏观平衡态热力学的基础上的。但是,实际上目标分子在两相间分配系数过大,且在固定相上的吸附等温线多不呈线性。所以,关于...
生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力,根据生物分子间亲和吸附和解离的原理,建立起来的色谱法称亲色谱法。 亲和色谱中两个进行专一结合的分子互称对方为配基。如抗原和抗体,抗原可认为是抗体的配基,反之抗体也可认为是抗原的配基。将一个水溶性配基在不伤害其生物学功能的情况下与水不溶性载体结合称为配基的固相...
IAC 是一种利用抗原抗体特异性可逆结合特性的 SPE 技术,根据抗原抗体的特异性亲和作用,从复杂的待测样品中捕获目标化合物。其原理是将抗体与惰性微珠共价结合,然后装柱,将含抗原的溶液过免疫亲和柱,抗原与固定了的抗体结合,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。用适当的缓冲液...
摘要介绍了固定金属离子亲和色谱法(IMAC)的方法原理、金属螯合柱的制备、固定金属离子 与蛋白质的相互作用以及影响这些作用的因素、不同色谱条件下各种作用力对蛋白质保留值的贡献、蛋 白质的洗脱原理和IMAC在蛋白质分离纯化中的应用,论述了IMAC的特点、不足、克服的方法和今后应 ...
六、1.色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配)的不同,或其他亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该物质时进行反复的吸附或分配等作用,从而将各组分分开。流动的混合物溶液称为流动相;固定的物质称为固定相(可以是固体或液体)柱色谱操作的一般步骤(1)装柱:包括湿法和干法...