技术优势:1、AP/MS得到的互作蛋白是在细胞内与诱饵蛋白结合的,符合体内真实生理情况,得到的结果可信度高。2、不像COIP采用抗体拉取蛋白复合物,可以有效的避免抗体的污染;得到的洗脱液可以直接做溶液酶解和质谱,大大减少了跑胶引起的蛋白损失。服务内容:1.构建带SBP标签的靶基因表达载体;2.质粒转染目的细胞,细胞...
该技术使用亲和纯化将蛋白质复合物从细胞或组织中分离出来,并使用质谱技术识别和定量这些复合物中的蛋白质。AP-MS技术的主要优势在于它能够鉴定蛋白质复合物中的成员和相互作用伙伴,同时还能够确定它们之间的结构和功能。然而,AP-MS技术在实践中还存在一些困难,例如假阳性结果和蛋白质表达量差异的问题。为了克服这些...
AP-MS已经成为发现蛋白质-蛋白质相互作用的标准方法。传统的方法是将天然蛋白免疫沉淀与质谱检测结合,然而AP-MS方法使用感兴趣的诱饵蛋白上的表位标签和捕获探针来识别协同的猎物蛋白,而不需要为每个新的诱饵蛋白购买或者开发特定抗体。此外,如果表位与相互作用所需的蛋白质界面重合,针对感兴趣蛋白质或诱饵的抗体可能会...
AP-MS亲和纯化质谱实验原理细胞表达融合了Strep等标签的诱饵蛋白,经裂解后与Streptactin珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,诱饵融合蛋白的互作蛋白也“共沉淀”到Beads上,洗涤掉非特异结合蛋白后,再将蛋白复合物洗脱下来。已知互作蛋白可以WB检测,未知互作蛋白可以质谱鉴定。 AP-MS亲和纯化实验流程 应用领域 辉骏实力...
先前的结果发现, ATF6的激活不会增加淀粉样蛋白ALLC的降解,但会显著降低ALLC的分泌和胞外聚集,且不会对正常蛋白的分泌,因此ATF6被认为是潜在的质量靶点,但ATF6调节的分子机制还不明确,本文中作者团队使用了定量亲和纯化质谱(q-AP-MS)对这一过程的相互作用蛋白进行了鉴定。
先前的结果发现, ATF6的激活不会增加淀粉样蛋白ALLC的降解,但会显著降低ALLC的分泌和胞外聚集,且不会对正常蛋白的分泌,因此ATF6被认为是潜在的质量靶点,但ATF6调节的分子机制还不明确,本文中作者团队使用了定量亲和纯化质谱(q-AP-MS)对这一过程的相互作用蛋白进行了鉴定。 作者首先选择了HEK293DAX细胞作为模型,...
通过配合使用亲和纯化与定量 MS,可在不同条件下对相互作用进行研究,从而提供更动态的蛋白质-蛋白质相互作用图。此外,这种工作流程还可进行 PTM 分析,以检测翻译后修饰 (PTM) 在促进蛋白质-蛋白质相互作用中的作用。 联系我们 点击图片放大 相关资源 同行评审文章:人类相...
亲和纯化/质谱(Affinity purification,AP/MS) 辉骏生物实验目的:寻找靶蛋白的互作蛋白 服务简介: 与常规Co-IP实验非常类似,只是亲和纯化法不需要引入抗体。将标签(如SBP)与特定基因融合表达,得到的融合蛋白可以采用链霉亲和素(strep)磁珠来亲和纯化,用生物素洗脱,最终得到蛋白复合物。
亲和纯化/质谱(Affinity purification,AP/MS) 辉骏生物实验目的:寻找靶蛋白的互作蛋白 服务简介: 与常规Co-IP实验非常类似,只是亲和纯化法不需要引入抗体。将标签(如SBP)与特定基因融合表达,得到的融合蛋白可以采用链霉亲和素(strep)磁珠来亲和纯化,用生物素洗脱,最终得到蛋白复合物。
先前的结果发现, ATF6的激活不会增加淀粉样蛋白ALLC的降解,但会显著降低ALLC的分泌和胞外聚集,且不会对正常蛋白的分泌,因此ATF6被认为是潜在的质量靶点,但ATF6调节的分子机制还不明确,本文中作者团队使用了定量亲和纯化质谱(q-AP-MS)对这一过程的相互作用蛋白进行了鉴定。