本文将介绍几种常用的亚细胞定位方法。 1.免疫荧光染色法 免疫荧光染色法是一种常用的亚细胞定位方法。该方法利用特异性抗体与目标分子结合,然后再用荧光标记的二抗或直接荧光标记的一抗来检测目标分子的位置。这种方法可以用来确定细胞内蛋白质、核酸、糖等分子的位置。该方法的优点是速度快、灵敏度高,可以同时检测多...
FISH与核质分离实验有相同的功能,都可以观察lncRNA的亚细胞定位,即lncRNA定位于胞浆还是胞核;FISH的图片应标注清楚每个图片中荧光所表示的分子,分组情况也要表明图注中应该包含细胞系的名称和处理方法,每种颜色的所代表的分子,这里标注的方式比较特别,直接在图上用不同的颜色来输入分子名称,用以代表荧光颜色,如红色、...
经过激光共聚焦照射,荧光蛋白会发出荧光,通过观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,从而可以确定目标蛋白的亚细胞定位情况,即可对蛋白质进行精确定位。 三、亚细胞定位操作步骤 1、通过一些在线网站预测亚细胞定位 2、亚细胞定位载体构建 (1)引物设计:利用引物设计软件,根据pEGFP-MCS-N1或pEGFP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因...
这是一款快速预测蛋白质的亚细胞定位预测方法的网站,网站的预测方法发表在Nature protocols 上,网站地址: http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/Reference: Kuo-Chen Chou, and Hong-Bin Shen, Cell…
本文总结了常见的植物蛋白亚细胞定位的方法,包括融合报告基因定位法、免疫组织化学定位法、共分离标记酶辅助定位法、蛋白质组学定位技术,下表就是对这4种植物蛋白亚细胞定位方法的总结。方法 原理 优点缺点 融合报告基因定位法 将目的蛋白基因与易于检测的报告基因进行融 合,构建融合基因表达载体, 表达融合蛋白, 然后借...
蛋白亚细胞定位方法1.挑单克隆斑加到30ml LB中,加AMP。37℃摇过夜。 2.分别取15ml菌液加到1L的LB中,加AMP,继续在37℃下摇至OD600=严格控制OD。 3. 加IPTG,使终浓度达到0.2mM,18℃摇过夜。 4. 在4℃下以7700 × g . 8000 rpm)离心10min. 5. 弃去上清,放在冰上。 6. 加入30~50mlice-cold 1× ...
02烟草亚细胞定位的方法1）挑取单克隆于5 ml LB液体培养中，28~30°C震荡培养。通常，LB中加入100 μ...
确定非编码RNA，如lncRNA和circRNA的亚细胞定位，对于理解其分子功能至关重要。通常，研究者会采用荧光标记探针进行荧光原位杂交（FISH）或分离胞浆和胞质的RNA进行PCR检测（核质分离）等方法。以Hu等在《分子癌症》期刊（2019年，卷18，第167页）的研究为例，他们采用FISH方法对NOZ和SGC-996细胞进行实验，...
处理和整合来自不同工具的结果,用于注释真核细胞和细菌蛋白质序列的亚细胞定位。我们将BUSCA与最近的CAFA实验和其他特定数据集得出的蛋白质目标进行比较,报告了最新技术水平。 BUSCA得分优于CAFA2的2732个目标的所有其他评估方法,F1值等于0.49,是预测CAFA3目标的最佳方法之一。我们建议将BUSCA作为蛋白质亚细胞定位注释的...