亚细胞定位实验原理主要是通过研究蛋白质的结构和功能来确定其在细胞内的位置。蛋白质的结构由氨基酸序列决定,氨基酸序列又决定了蛋白质的三维结构,而三维结构又决定了蛋白质的功能和作用。因此,通过研究蛋白质的结构和功能,可以确定其在细胞内的位置。此外,通常会将目的蛋白与报告基因(如绿色荧光蛋白基因EGFP、红色荧光...
亚细胞定位:指某种生物大分子物质或脂类在细胞内存在的具体位置。 二、亚细胞定位原理 利用GFP、RFP等荧光蛋白具有的独特荧光性质和灵敏性,来示踪细胞内的蛋白。将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合,通过瞬转或稳转,使该融合蛋白在受体材料细胞内表达,目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器。经过激光共聚焦照射...
原理:构各职方磁说最宽量翻按建编码目标蛋白和荧光蛋白的融合蛋白的载体,转染细胞,来自表达,然后激光共聚焦显微镜观察荧光信号所在位置,即可知道该蛋白的亚细胞定位。注意做空载荧光蛋白的对照。具体步骤:构建目标蛋白与GFP的融合蛋白的瞬时表达载体,基因枪轰击洋葱内360问答表皮细胞,或化学(PEG)转化原生质体,瞬时表达后...