在TMT检测过程中,氨基反应基团可以和样本中蛋白肽段的N末端或末端赖氨酸侧链基团的游离氨基共价结合,从而使肽段成功标记上TMT标签后进入质谱检测。在串联质谱检测中,由于不同TMT标签有不同质量的报告基团,一级质谱检测可通过质量平衡基团使不同样本的同一肽段具有相同的质荷比(m/z)。相同质荷比肽段进入二级质谱后...
2.蛋白酶解、肽段标记:对20例脱髓鞘疾病患者和10例NND患者行腰椎穿刺,取脑脊液标本于1.5 ml微型离心管中,置于-80 ℃冰箱。每个标本取100 μg蛋白质,采用滤器辅助的样品制备酶解法[9]在37 ℃胰蛋白酶作用下进行酶解。按照说明书用10 p...
串联质谱标签TMT标记定量流程如下: (1)首先使用胰酶对蛋白进行酶解消化,之后使用TMTpro 16标试剂盒对肽段进行标记。 (2)标记后的样品混合在一起,使用高pH分级离心小柱实现简便、快速地TMT样品分级,避免了传统分级需要单独一台液相色谱的高成本和繁琐流程。 (3)Orbitrap Fusio Lumos质谱平台结合Nano-LC,与传统的Q E...
### TMT标记的原理: 1. **化学标记:** TMT标签是一种包含多个同位素的化学物质,这些同位素的质量稍微不同。标签中的同位素数量决定了标签的质量。对于TMT,一般有6个同位素,分别用于标记6个不同的样品。 2. **标记位点:** TMT标签包含一个活性基团,该基团能够与蛋白质中的氨基或羟基反应,形成一个共价键。这...
iTRAQ/TMT 体外标记定量蛋白质组学 可同时定量分析 2-10 个样品; 体外标记,不受样品类型限制; 可鉴定多达6000个蛋白; 实验稳定度和重复度较高。 SILAC/Dimethyl 体内标记定量蛋白质组学 可对比23 个样品; 体内标记,标记稳定,组间误差小; 需要的样本量较小,仅需几十微克的蛋白。 SWATH DIA 全景蛋白质组学 ...
TandemMass Tags 串联质谱标签TMT 定量蛋白分析 串联质谱标签Tandem Mass Tags(TMT)定量蛋白分析系统可以在一次实验中对多个样品进 行全蛋白质组定量分析,由于其通量高、准确度高、对低丰度蛋白的鉴定效率高,是多样品 定量分析很好的选择。 串联质谱标签 TMT 标记试剂由氨基反应基团,质量平衡基团,以及报告离子基团组成...
加入1 μg/μL Trypsin,100 μg蛋白质底物加入3.3 μg酶,37℃水浴24 h。冻干消化液,然后每管加入25 μL TEAB(200 mmol/L)复溶肽段。每管加入41 μL乙腈,加入TMT标记试剂,混匀后,室温孵育1 h;加入8 μL 5%羟胺,室温放置...
加入1 μg/μL Trypsin,100 μg蛋白质底物加入3.3 μg酶,37℃水浴24 h。冻干消化液,然后每管加入25 μL TEAB(200 mmol/L)复溶肽段。每管加入41 μL乙腈,加入TMT标记试剂,混匀后,室温孵育1 h;加入8 μL 5%羟胺,室温放置15 min,真空浓缩仪抽干。
随即加入200μLTEAB溶液(50mmol/L),4℃、14000×g离心40min,弃上清液。加入1μg/μLTrypsin,100μg蛋白质底物加入3.3μg酶,37℃水浴24h。冻干消化液,然后每管加入25μLTEAB(200mmol/L)复溶肽段。每管加入41μL乙腈,加入TMT标记试剂,混匀后,室温孵育1h;加入8μL5%羟胺,室温放置15min,真空浓缩仪抽干。
新一代串联质谱标签系统(TMTpro)实现16通道蛋白质组定量分析, 在顶级期刊中的定量蛋白质组学进展—TMT标记的技术进展和临床应用中的讲座。 jianglingling 粉丝37 + 关注 评论 全部评论0最新推荐 浙江福立仪器发布新品L75液相全能冠军家族,院士致辞 柔荑含莲 36次观看 · 2024.11.08 固体饮料食品安全风险控制 ...