人脐带血中性粒细胞的门控策略。 首先排除双链细胞和死亡细胞,然后排除CD45-细胞。在总粒细胞被CD15和CD66b门控之前,排除谱系细胞和单核细胞。因此,在使用CD11b和CD16对中性粒细胞亚群进行经典命名之前,嗜酸性粒细胞被排除在外。 Human中性粒细胞的门控策略。作为使用CD11b vs CD16的替代方法人脐带血中性粒细胞...
3.分别以200 g/25 min 和400 g/15 min离心 4.收集75%至62% Percoll层之间的中性粒细胞至另一个50 mL离心管中(图1)。 5.加入RPMI1640洗一次,300 g/5 min离心。 6.弃上清,加入1 mL neutrophil buffer。 图1 人外周血PBMC中性粒细胞样本制备 Part.3/ Cytospin and staining(细胞离心涂片和染色) Part....
增殖活性消失:成熟中性粒细胞不再增殖,功能转为免疫防御和应激响应。 因此,研究中性粒细胞的成熟除了从核形态、功能、表面标记物(流式)来评估以外,增殖也是一个重要的角度。 EdU, BrdU, 和 CFSE 的比较 EdU BrdU CFSE 可以看到在flowjo中,前者增殖活性与荧光强度成正比,而CFSE荧光强度随着细胞分裂而减弱,所以增殖...
我们今天就对中性粒细胞从骨髓发育到释放入血的整个流式检测进行一个梳理吧~ Ng LG, Liu Z, Kwok I, Ginhoux F. Origin and Heterogeneity of Tissue Myeloid Cells: A Focus on GMP-Derived Monocytes and Neutrophils.Annu Rev Immunol. 2023;41:375-404. 树状图能够很清晰地看到中性粒的来龙去脉: 接下来...
1.排除坏死细胞:使用Zombie NIR染料来识别坏死细胞(Zombie-NIR+7-AAD+),并将其从分析中排除。 2.NETotic中性粒细胞的标记:中性粒细胞如果表达7-AAD(表明有DNA的存在)并且Zombie NIR弱表达(Zombie-NIRdim7-AAD+),则表明这些细胞具有附着的DNA,这是NETs的特征。
下图是多参数流式同时检测4种中性粒细胞功能的流程示例和结果图。(A) 检测工作流程的示意图。在添加 ROS 检测染料 DHR123 之前,中性粒细胞与细胞因子或药物一起孵育,并与表达 iRFP 的真菌病原体白色念珠菌共培养。共孵育后,对中性粒细胞...
在探讨优化的中性粒细胞流式检测方案时，我们首先针对人类骨髓与脐带血中的中性粒细胞进行了详细分析。人类骨髓中性粒细胞的样品制备过程包含了几个关键步骤：首先，从ACD-A肝素生理盐水中收集骨髓样本。接着，使用1倍PBS洗涤并进行4℃、400 × g离心5分钟，以去除上清，进行细胞计数。随后，通过纯化的抗...
中性粒细胞(PMNs)是外周血循环中最丰富的白细胞,是由骨髓样前体在骨髓中不断产生的,骨髓的造血干细胞每天约产生1000亿个这种细胞,而造血干细胞需经历一系列分化得以产生中性粒细胞,造血干细胞通过产生一种多能祖细胞,并进一步发展成一种常见的骨髓祖细胞,这些常见...
流式分选出以上亚群,并对其形态和发育潜能进行研究,发现CD34dim 和CD34dim/- 的NCPS为早幼粒细胞的”上游”细胞 表达不同水平的CD45RA。 04 NCP1s和NCP2s体外培养可独立分化为中性粒细胞 为研究NCPS的发育过程,分选上述4种NCPS分别进行体外培养,流式分析表型,发现NCP1s( CD34+ CD45RA- )可通 下调CD34的表...
流式分选出以上亚群,并对其形态和发育潜能进行研究,发现CD34dim和CD34dim/-的NCPS为早幼粒细胞的”上游”细胞 表达不同水平的CD45RA。 04 NCP1s和NCP2s体外培养可独立分化为中性粒细胞 为研究NCPS的发育过程,分选上述4种NCPS分别进行体外培养,流式分析表型,发现NCP1s( CD34+CD45RA-)可通 下调CD34的表达而直...