方法：分别构建慢病毒调控元件WPRE 和单拷贝基因白蛋白（Alb ）基因的重组质粒，紫外吸收法测量后经数学换算得到相应的拷贝数，以梯度稀释质粒为模板，利用基于SYBR Green 的荧光定量PCR 制作标准曲线，最后将待测样品的Ct 值代入标准曲线，根据相应公式计算慢病毒滴度。结果：WPRE 元件和Alb 基因质粒的标准曲线回归方程...
本发明公开了一种检测慢病毒病毒滴度的实时荧光定量PCR引物,试剂盒及方法,本发明的引物是落在慢病毒的包膜上,不需要荧光标签即可对滴度进行检测.另外,本发明检测的是感染了细胞并且成功整合的病毒,能体现出病毒的真实感染活力,且不受细胞基因组DNA提取效率影响,具有操作简便,灵敏度高的特点.蓝田...
本发明公开了一种检测慢病毒病毒滴度的实时荧光定量PCR引物、试剂盒及方法,本发明的引物是落在慢病毒的包膜上,不需要荧光标签即可对滴度进行检测。另外,本发明检测的是感染了细胞并且成功整合的病毒,能体现出病毒的真实感染活力,且不受细胞基因组DNA提取效率影响,具有操作简便、灵敏度高的特点。 法律状态 法律状态公告...
一种检测慢病毒病毒滴度的实时荧光定量pcr试剂盒,其特征在于,该试剂盒中含有上述的引物。 一种检测慢病毒病毒滴度的实时荧光定量pcr方法,其特征在于,包括以下步骤: 1)细胞计数记录为b,稀释病毒,并将病毒转导到细胞中; 2)病毒转导45～52小时后,收集细胞的基因组dna; 3)以提取得到的基因组dna作为模板,用上述的引物...
当慢病毒表达荧光报告蛋白如gfp时,流式细胞术(facs)是最直接的方法。然而,facs不能区分被单个或多个病毒感染的细胞。定量pcr(qpcr)通过测量每个宿主细胞基因组的原病毒dna拷贝数来检测病毒整合。为了确定每个细胞的整合病毒,必须用含有已知数量的标准品制备标准曲线。目前为止,基于qpcr的方法被认为是检测慢病毒感染效价...
本发明公开了一种检测慢病毒病毒滴度的实时荧光定量PCR引物,试剂盒及方法,本发明的引物是落在慢病毒的包膜上,不需要荧光标签即可对滴度进行检测.另外,本发明检测的是感染了细胞并且成功整合的病毒,能体现出病毒的真实感染活力,且不受细胞基因组DNA提取效率影响,具有操作简便,灵敏度高的特点.蓝田...
慢病毒滴度实时荧光定量PCRWPRE白蛋白基因目的:建立一种有效,灵敏,准确的慢病毒滴度的分子检测方法.方法:分别构建慢病毒调控元件WPRE和单拷贝基因白蛋白(Alb)基因的重组质粒,紫外吸收法测量后经数学换算得到相应的拷贝数,以梯度稀释质粒为模板,利用基于SYBR Green的荧光定量PCR制作标准曲线,最后将待测样品的Ct值代入标准...
本发明公开了一种基于gag基因检测重组慢病毒滴度的方法,包括如下3个部分:慢病毒gag基因的引物设计、构建检测慢病毒的标准品和荧光定量PCR法测定滴度,操作方便,检测结果精确。由于慢病毒gag基因编码p55的蛋白前体,经蛋白酶裂解而形成病毒的核衣壳蛋白(p7)、内膜蛋白(p17)和衣壳蛋白(p24),因此gag所编码的蛋白是病毒粒子...
53.所述第二试剂瓶包括引物试剂瓶、pcr酶试剂瓶、染料试剂瓶和探针试剂瓶,引物试剂瓶有2个,分别装有上游引物(wf primer)和下游引物(wr primer),pcr酶试剂瓶中装有荧光定量pcr酶(2x taqman qpcr mix),染料试剂瓶中装有定量pcr参考染料(rox),探针试剂瓶中装有探针(probe),引物和探针的序列如表1所示。54.表1...
当慢病毒表达荧光报告(如gfp)时,流式细胞术(facs)是最直接的方法。定量pcr(q-pcr)通过测量每个宿主细胞基因组的前病毒dna拷贝数来检测病毒的整合。为了确定每个细胞的整合病毒,必须用含有已知数量的pcr靶标的dna材料制备标准曲线,过程繁琐且耗时长。目前有研究者提出使用protein l蛋白来检测慢病毒载体的感染效率,...