两步法RT-PCR为建立快速,简便,灵敏度高,特异性强的RT-PCR检测马铃薯病毒技术,采用试剂盒和Total试剂2种方法,从马铃薯叶片和茎秆中提取马铃薯X病毒,马铃薯Y病毒,马铃薯S病毒,马铃薯A病毒以及马铃薯卷叶病毒的RNA.设计了5种马铃薯病毒引物,同时应用一步法RT-PCR和两步法RT-PCR的反应体系对5种病毒扩增,分别得到620bp(...
一步法rt-pcr在处理大量样品时易于操作,有助于减少残余污 染,因为在cdna合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度,最低可以达到0.1pg总rna,这是因为整个cdna样品都被扩增。 对于成功的一步法rt-pcr, 一般使用反义的基因特异性引物起始cdna合成。 一步法 两步法 起始第一链cdna合成使用: 起始...
两步法有中间产物cDNA,但稍微麻烦一点;一步法简单,但得不到cDNA.结果一 题目 一步法和两步法RT-PCR的根本区别?如题RNA---逆转录酶---cDNAcDNA--转录酶---DNA是不是一步法就是两个步骤在一起做,那要加两种酶是吗? 答案 两步法有中间产物cDNA,但稍微麻烦一点;一步法简单,但得不到cDNA. 结果二 题目 ...
一步法RT—PCR两步法RT—PCR通过一步法RT—PCR和两步法RT—PCR扩增裸大麦内参基因β-actin,都得到500bp的目的片段.结果表明,一步法RT—PCR和两步法RT—PCR都能快速检测出目的基因,一步法比较简便,快速,污染少,但是有明显的引物二聚体形成,对后续的荧光定量试验不利;两步法灵敏度更高而且比较经济,目的条带单一...