Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit是一款简便、快速、高效的DNA定向克隆产品,该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点,可高效克隆50 bp-10 kb片段。将载体线性化,并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的线性化载体末端同源序列,使得插入片段PCR产物5’和3’末端分别带有与线性化载体...
» 转化、涂板:将重组产物直接转化后涂平板,阳性克隆鉴定。图1:Hieff Clone®一步法快速定向克隆试剂盒进行单片段和多片段克隆实验流程图。实验数据 » 单片段高效重组图2:Hieff Clone® One Step Cloning Kit可以有效克隆不同长度的单片段基因。
设计简单:在插入片段的PCR扩增引物5’端引入15-25 bp与载体末端同源的序列即可。 小翌在这里给大家推荐一款翌圣新品,通用型多片段一步法快速克隆试剂盒(Cat#10923ES),该产品连接效率高,菌落数多,小体系连接不仅省酶,也省片段/载体! Q3 一步法克隆试剂盒连接反应总体系20 μL,但载体/片段浓度低可否使用小体系...
多片段一步法快速克隆试剂盒 如何实现快速的一步克隆呢 一. 制备线性化载体 选择合适的克隆位点,并对载体进行线性化。建议尽量选择无重复序列且GC含量均匀的区域进行克隆。载体克隆位点上下游25 bp区域内GC含量均在40%-60%范围内最佳。线性化载体可通过限制性内切酶酶切或反向PCR扩增获得。 有些重组反应体系兼容几乎...
这项技术之所以被称为“一步克隆法”,是因为它能在一个简单的步骤中,轻松地将多个线性DNA片段组装成一个完整的质粒,极大地简化了传统克隆方法的繁琐步骤。是不是听起来很酷? 技术原理 Gibson组装法的神奇之处在于它巧妙地利用了三种酶在同一温度下协同工作的特性: T5核酸外切酶:负责从DNA片段的5'端切割,产生长突...
» 转化、涂板:将重组产物直接转化后涂平板,阳性克隆鉴定。图1:Hieff Clone®一步法快速定向克隆试剂盒进行单片段和多片段克隆实验流程图。实验数据 » 单片段高效重组图2:Hieff Clone® One Step Cloning Kit可以有效克隆不同长度的单片段基因。
下面,我们将从原理、使用步骤和应用三个方面,对一步法克隆试剂盒进行详细介绍。 一、一步法克隆试剂盒的工作原理 一步法克隆试剂盒采用了先进的同源重组技术,能够在短时间内实现DNA片段的高效克隆。其原理主要是利用特定的酶系统,将目的DNA片段与载体DNA进行精确的同源重组,从而...
一步克隆法原理 一步法同源重组是一种利用同源重组的原理,进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑酶切位点,几乎适用于任何载体与任何片段的定向克隆。操作过程简单快速,只需50℃,20min即可完成反应。 一步法同源重组是一种利用同源重组的原理,进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑酶切位点,几乎适用于任何载体与任何...
一步法快速克隆试剂盒运用到的分子克隆技术是什么? 翌圣Hieff Clone®系列一步法快速克隆试剂盒运用的是Gibson Assembly同源重组技术,其使用的同源重组酶兼具外切酶活性、DNA聚合酶活性和连接酶活性。 外切酶活性:该酶能特异性地识别载体和插入片段末端的15-25 bp的同源序列,并沿着5';→3';方向切割dsDNA,从而产生粘...
一步法快速克隆试剂盒是一款简便、快速、高效的DNA定向克隆产品,该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点,可高效克隆50 bp-10 kb片段。将载体线性化,并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的线性化载体末端同源序列,使得插入片段PCR产物5’和3’末端分别带有与线性化载体两末端对应的完全一致的...