3.IP后WB实验→根据目标蛋白分子量,选择轻链特异性二抗或Fc片段特异性二抗在IP或 co-IP实验中,IP实验及之后的WB实验的操作过程中通常会用到相同的一抗或同种属来源的一抗、这种情况下,如果使用常规无特异性的Whole IgG酶标二抗,WB实验中IP抗体变性后产生的重链(55kDa)和轻链(25kDa)都能够识别, 而此非特异的信...
根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。如果一抗是小鼠来源的抗体,二抗则选抗小鼠的二抗;如果一抗是兔来源抗体,则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。 2.一抗的亚型 一般来说多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。而单克隆抗体则相对复杂些,具有多种亚型,二抗除了要与一抗的种属来源...
1、二抗的反应种属与一抗的来源宿主相对应 在前面介绍抗体小知识的时候我们提过，抗体的Fc段是结合二抗的区域。因此二抗识别的是一抗的重链恒定区，只与一抗的种属来源有关。如果一抗的来源是兔子，那么二抗选择识别兔子的（anti-rabbit）即可。2、二抗需与一抗的免疫球蛋白类型对应 如果一抗是多抗，比如来源于...
对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,而是选兔源的一抗,二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。
一抗和二抗的选择 一抗的选择 检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：分析试验应用的类型l 样本蛋白的结构性质l 样本的种属l 抗体宿主的种类l 抗体的标记和检测l 1.分析试验应用的类型 一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型...
一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团,而且一抗可以至少结合两种其他基团(底物和二抗),如下图是直标一抗。 二抗的作用 一抗是特异性的结合目标蛋白,一抗需要发光物质或者显色基团标记才能被检测出来,否者一抗和蛋白的结合与否用肉眼是看不出来的。但是一抗往往比较特异每个都标记成本很高,通常会使用标记二...
多克隆抗体主要是 IgG 类免疫球蛋白,相应二抗应为抗 IgG 抗体;单克隆抗体由于存在不同的类别和亚型,二抗选择时需要根据一抗类型或是亚类相匹配。 二抗分为完整抗体和抗体片段两种,使用哪种需要根据实验来进行决定。主要有IgG分子完整抗体、Fab 片段以及 F(ab’)2 片段。
一抗选择 •1.分析试验应用类型WB（WesternBlot免疫印迹）IHC（immunohistochemistry免疫组织化学）ELISA（enzyme-linkedimmunoadsordentassay 酶联免疫吸附试验）一抗二抗的选择 2/17 •2.样本蛋白结构性质 样本蛋白结构域全长蛋白、蛋白片段、多肽、细菌、细胞 蛋白片断或一个特殊同型物或蛋白全长某一区域 用FACS流...
二抗,就是第二抗体,它的作用是与一抗结合,形成可见的荧光信号。同样地,二抗的选择也非常重要,因为它会影响到最终的荧光信号强度和分布。那么,如何挑选出最合适的二抗呢?这里给大家提供几个参考因素: 1.特异性:二抗要能够特异性地识别一抗结合的目标抗原,不能与其它抗原发生反应。这样才能保证实验结果的准确性。
根据一抗如何选择二抗 确定一抗的来源物种,二抗的反应物种与一抗的来源种属相同即可。例如一抗为鼠源抗体,二抗选择X-鼠(羊抗鼠,兔抗鼠)。 除了要与一抗的种属来源相一致,二抗还需与一抗的类别或亚类相匹配,对于多克隆抗体一般多是IgG类型,二抗可以选择X-鼠IgG(羊抗鼠IgG,兔抗鼠IgG)抗体。而单克隆抗体则...