WST-8法测定SOD活性的原理是,利用超氧阴离子的还原能力将WST-8还原为有色产物,通过测量产物的吸光度来间接测定SOD的活性。该方法的优点是简便、灵敏、重复性好,适用于多种生物体系。 2.SOD活性测定步骤: (1)制备反应液:将WST-8溶液与辣根过氧化物酶(HRP)溶液按一定比例混合,得到WST-8/HRP工作液。 (2)制备...
WST-8法检测NAD+和NADH总量的原理参考图1。 b. 单独测定NADH的量:60℃水浴加热30分钟后,样品中NAD+会分解而只保留NADH。NADH将WST-8还原成formazan,通过比色法确定反应生成的formazan的量,最终可以确定样品中NADH的量。 c. 测定NAD+以及NAD+/NADH比值:根据前两步检测获得的NAD+和NADH的总量以及NADH的量,即可...
本试剂盒可检测样品中的G6P含量,具体原理如下:葡萄糖-6-磷酸(G6P)在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH)的作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸内酯(6-phosphogluconate, 6-PG),在这一反应过程中NADP+被还原为NADPH,生成的NADPH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methy...
DNP法即2,4-二硝基苯肼法,其原理是LDH催化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸和2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine)反应,生成二硝基苯腙(2,4-dinitrophenylhydrazone),在碱性溶液中呈棕红色,其颜色深浅与LDH量成正比。DNP法步骤较为繁琐,一般较为少用。INT法,如碧云天乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(C0016/C0017),...
WST-8法的原理参考下图,WST-8可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye),该反应步骤可以被SOD所抑制。通过对WST-8产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。 基于黄嘌呤氧化酶藕联反应体系和WST-8的SOD酶活力检测原理图。XO:xanthine oxidase。 WST-8的反应产物是稳定的水溶...
一:生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应,其反应过程可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图。 延迟区:无规律可寻。 等速区:对应的是速率法,一般应用于酶活力的检测。 过渡区:对应的是固定时间法,目的是解决某些化学反应的...
超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(WST-8法)测定原理: 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可与 WST-8 反应产生水溶性染料甲臜,后者在 450nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液黄色越深,说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。
检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲 (Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲 ,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于...
而W ST 28法只需将W ST 28试剂按比例加入到细胞培养板中,经过一定时间孵育,活细胞即可将W ST 28代谢为水溶性的甲 染料,即可直接测定细胞活性。本实验选用体外培养的人乳腺癌细胞M CF 27,经不同浓度A p igen in 处理后,分别用M T T 、W ST 28法检测A p igen in 对M CF 27细胞的生长抑制作用,以...
测定原理: 通过黄嘌-呤及黄嘌-呤氧化-酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可与 WST-8 反应产生水溶性染料甲臜,后者在 450nm 处有吸收;SOD 可清除 O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液黄色越深,说明 SOD 活性愈低,反之活性越高。 需自备的仪器和用品: 分光光度计、离心机、移液器、1mL 玻璃比色皿、...