在Western Blotting技术中，一抗的作用是识别并结合特定的蛋白质。一抗的选择依据是目标蛋白质的特性，因此如果目标蛋白质是不常见的，可能需要定制一抗。例如，可以通过将目标蛋白注射到兔子体内来获取针对该蛋白的特异性抗体。二抗则是用来识别一抗的抗体，根据一抗来源的不同，二抗也会有所不同。比如，...
一抗就是针对你的蛋白的抗体,一般比较特异,若你的蛋白不是常见的,则需要定制(譬如用你的蛋白注射兔子)二抗是针对一抗的抗体,看你的一抗来自哪种动物,它具有普遍性.不管你的蛋白是什么,只要是从某种动物譬如兔子中获得的一抗,二抗就都可以用同一种抗兔的.所以商品化程度很高二抗上一般链接一些基团,经反应后显色...
一抗结合之后,就是采用二抗,二抗可与一抗结合,而二抗蛋白结构被HRP辣根过氧化物酶标记,可与发光底物相结合,该底物极强的信号输出能够使皮克量的蛋白得到检测。 总之,选好自己的一抗是很重要的。特异性高的一抗,WB你怎么做都能出;特异性差的抗体,WB发明人...
二次抗体一般是与一抗来源的物种不同的抗体,通常是羊或兔抗体,其中含有与一抗特异性结合的荧光素或酶标记物。 信号检测:通过荧光素或酶标记物的反应来检测蛋白质。荧光素标记的二抗可以通过荧光显微镜来检测,而酶标记物通常使用显色剂如TMB或者BCIP/NBT来检测。这些显色剂会和酶标记的二抗反应,形成可以被观察到的...
WB,是Western blotting的缩写,即蛋白质印迹法,又称免疫印迹(immunoblotting),也就通过电泳技术分离不同组分,再采用印迹技术将蛋白质转移(“印”)到特定的膜上,再利用抗原-抗体的特异性结合原理,用抗体作为探针去实现检测复杂样品中的靶标蛋白的方法,这项技术也可以用来检测不同时期蛋白表达的水平以及蛋白相互作用等...
具体来说,WB是将细胞中的大量蛋白分离后,先利用一种载体(如一张膜)抓住蛋白,然后用能与该蛋白特异结合的抗体识别蛋白(这种特性性抗体我们习惯叫做“一抗”,不带任何标记,即抗体上没有酶也没有荧光),接着再用带有标记的抗体(我们习惯叫“二抗”)识别一抗。这样一来,三个小盆友手拉手,蛋白拉着一抗,一抗拉...
Western blotting,即蛋白质印迹或免疫印迹,是一种基于抗原-抗体特异性结合的生物化学分析技术,用以鉴定和分析细胞或组织样本中特定蛋白质的表达。 PAGE是一种利用蛋白质分子的电泳迁移率来实现分离蛋白质的技术。该技术以分子的电荷、大小(分子量)和形状为基础,通过聚丙烯酰胺凝胶中形成的孔隙实现分析物的移动。
▲一抗识别膜上蛋白或修饰性抗原表位,二抗识别一抗恒定区从而与一抗结合,最终通过二抗携带的荧光或酶显色信号,达到对样本中目的蛋白进行检测的目的。 2)抗体如何选择 对于任何一种目的蛋白,都有不止一种有效抗体;为缩小选择范围,我们通常考虑以下几个方面: ...
另外就是一抗、二抗稀释比,先按说明书的高稀释比来吧,尤其是国产的。至于封闭时间,个人认为一开始就应该至少 2 小时,再视胶片背景调整。二抗孵育时间个人认为 1 小时足够。洗膜的话个人认为二抗孵育后的洗膜时间及次数较为重要,第一次至少洗 3 次,每次 10 分钟吧,具体再视胶片背景调整。最后就是调节曝光时间...
一。免疫印迹法 免疫印迹法(immunoblotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似,亦被称为Wester